量子点荧光标记法在微量白血病细胞检测中的应用

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目的:儿童急性白血病是小儿血液系统疾病中威胁儿童生命第一位的肿瘤,早期诊断对治疗和预后起着非常重要的作用。但有些白血病患儿因骨髓纤维化或其他原因导致"干抽",仅能取得极微量细胞,尤其是脑脊液中细胞数更少,以致患儿无法得到科学全面诊断。近年来,量子点因具有发射光谱窄而对称、激发光谱宽而连续、光化学稳定性好、荧光强度高、耐光漂白等优势而被应用疾病的诊断。本实验利用量子点(Quantum dots,QDs)荧光标记技术对临床上急性白血病患儿的免疫分型和脑脊液细胞学进行快速特异性诊断,探讨基于量子点诊断的快速特异性和优越性,以期应用于临床上因骨髓抽取困难无法进行流式检测的急性白血病患儿和中枢神经系统白血病的早期诊断。  方法:取急性白血病患儿32例(干抽组12例,能够正常取材组20例),除一例复发病例外,其余均为初诊病例。其中男性22例,女性10例;年龄:最大13岁,最小6个月,平均6.5岁。取长期发热,排除血液系统各种疾病的患儿为阴性对照,TBS缓冲液为空白对照。脑脊液取自行腰椎穿刺进行脑脊液检查的患儿12例,其中男性8例,女性4例;年龄:最大8岁,最小2岁。取骨髓血和脑脊液进行涂片,在温和的水相条件下制备出水溶性的巯基乙酸量子点,用发射波长不同的量子点(605、525nm)来标记链霉亲和素复合物QDs-SA,利用免疫荧光技术分别检测每张涂片上B细胞系、T细胞系和髓细胞系不同抗原的表达。  结果:修饰后的QDs-SA复合物与巯基乙酸量子点的光学特征变化不大,荧光显微镜下观察到B系急性淋巴细胞白血病有18例,T系急性淋巴细胞白血病4例,急性髓系白血病有10例;脑脊液细胞学(3/12)有幼稚细胞的检出。  结论:表面修饰后的量子点有更好的相容性,而且减少了它的表面毒性。量子点荧光标记技术能够同时检测出骨髓涂片上B细胞系、T细胞系和髓细胞系不同抗原的表达,而且有较强的光学稳定性和很高的阳性信号。因此,量子点作为新型荧光探针,显示了其优越性和快速特异性,有望成为因骨髓抽取困难无法进行早期全面诊断患儿的辅助检查手段以及进行中枢神经系统白血病诊断的早期诊断方法。
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