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研究背景与目的 肝细胞癌（HCC）是世界上常见的恶性肿瘤之一，在我国已成为第二大常见恶性肿瘤，其治疗相当困难。小肝癌治疗以手术切除最为有效，但临床上常因肿瘤生长部位特殊或患者肝功能情况差而不宜手术，且手术治疗仍有较高的复发率，因而各种肿瘤局部灭活治疗方法应运而生。其中经皮酒精注射（PEI）因其操作简便，安全有效，费用低廉而成为目前世界上应用最广泛的微侵袭治疗小肝癌的方法，但酒精渗透能力有限，需较大剂量和多部位多次注射才能使肿瘤完全坏死，而且部分患者对酒精过敏，这些因素不同程度地限制了PEI的临床应用。1994年，Ohnishi首先报道了经皮乙酸注射（PAI）治疗小肝癌，发现PAI治疗小肝癌肿瘤灭活效应明显大于PEI，副作用小，有望替代PEI。由于PAI治疗肝癌目前尚处于探索和发展阶段，许多问题有待深入研究，如乙酸的肿瘤灭活机理的深入研究将对PAI治疗肿瘤相关一系列问题的解决起指导作用，PAI治疗中乙酸浓度及剂量的研究对提高疗效，减少毒副作用有重要意义。本实验研究即以兔VX2肝种植瘤为实验对象，采用不同浓度乙酸瘤内注射治疗，旨在选择适宜的乙酸浓度，并通过PAI与PEI对照研究旨在PAI的治疗机理、疗效及可行性方面做进一步探索研究。 材料和方法 1．肝种植瘤模型制作 新西兰大白兔32只，采用剖腹包埋接种法，于肝左内叶、中央叶穿刺接种VX2瘤株碎块，单发瘤模型接种一点共22只兔，多发瘤模型接种三点共10只兔。10～14天后行B超和CT检查，0.5cm以上瘤灶可作实验模型。 2．不同浓度乙酸治疗对比实验 单发瘤兔模型20只，随机分成4组（每组5只）：生理盐水对照组，25%乙酸组，50%乙酸组和75%乙酸组。B超导引下瘤内一次性注射相应药物1.Oml，观察实验动物治疗后一般情况，肝肾功能变化，治疗后14天肿瘤生长情况及病理改变。3.PAI与PEI治疗对照实验 多发瘤兔模型8只，每只兔肝内3个瘤灶分别一次性注射50%乙酸，无水酒精和生理盐水，注射剂量以超声显示病灶被药液完全浸润为度。观察注射后1小时、1天、3天和14天大体、光镜、电镜下肿瘤病理改变及14天后肿瘤生长情况。 结果1.动物模型制作:V凡瘤株肝内接种成功率%.2%，肝外误种率巧.6%，腹水9.4%，切口感染率12.5%。接种后14天，肝内瘤灶平均0.90士0.25cm，B超、CT增强扫描显示肿瘤血供丰富，以肝动脉供血为主。肿瘤呈白色结节状，鱼肉样，无包膜，肿瘤有早期发生转移的特点，转移以肺、肝内转移及腹腔淋巴结转移为主。2.不同浓度乙酸治疗实验:25%、50%、75%乙酸瘤内注射后，1天内实验兔表现有中毒症状，以75%为明显，3天后症状逐渐改善。肝肾功能变化:治疗后1天，25%、50%乙酸组以肝功能损害为明显，75%乙酸组肝功、肾功均有显著性改变;7天后25%、50%乙酸组肝功能恢复，而75%乙酸组肾功能恢复，但肝功能指标水平仍显著高于治疗前水平。治疗后14天肿瘤增长率各浓度组间比较无显著性差异，但与生理盐水对照组比较均有显著性差异;肿瘤坏死率比较50%、75%乙酸组肿瘤坏死明显，与25%乙酸组及生理盐水组有显著性差异，而50%与75%两组间无显著性差异。实验结果表明50%乙酸为适宜的治疗浓度。3.多发瘤内分别注射生理盐水、50%乙酸、无水酒精治疗对照实验:一次性瘤内注射药物剂量三组无显著性差异。PAI组肿瘤增长率最小 （257.39士140.64%），肿瘤坏死率最大（46.27士16.30%），均与生理盐水对照组有显著性差异（P、率二0.036，P坏死率二0.000），与PEI组比较无显著性差异。组织病理学改变:队I后1小时电镜下肿瘤细胞呈溶解样坏死;1天、3天肿瘤中央区大片凝固性坏死，边缘部呈网格状坏死，一3一岛状残留瘤灶内可见扩张血管，电镜下边缘部肿瘤细胞以膜性结构破坏为主，3天后胞膜、核膜消失，细胞坏死崩解，可见大量自噬体形成及纤维增生;14天后肿瘤表现大片凝固性坏死，边缘少量或残留肿瘤组织，并见大量肉芽组织增生。PEI组各时段、区域肿瘤组织细胞破坏坏死改变相对队I改变较轻，纤维、肉芽组织增生较少而且较晚，PEI治疗后肿瘤血管内皮细胞损伤表现较明显，PAI组肿瘤凋亡细胞出现机会增多。 结论1.PAI具有肿瘤灭活作用，其效力高于PEI，PAI可替代PEI用于小肝癌临床治疗。2.PAI肿瘤灭活效应与肿瘤局部乙酸量有关，而大剂量高浓度乙酸注射可引起兔肝肾功能损害，50%乙酸为兔VXZ肝癌模型较适宜的治疗浓度。3.“一次性药物全瘤覆盖法”队I治疗较难达到肿瘤完全灭活，临床上对于较大的肝癌行PAI治疗可能仍需多次注射治疗才可能达到肿瘤完全灭活。而较低浓度乙酸对肿瘤血管破坏作用可能有限。4.PAI肿瘤灭活效应主要是由乙酸的特性决定的，其作用途径有:蛋白凝固，腐蚀、溶解组织细胞以及损伤破坏细胞膜性结构。5.乙酸可能有诱导细胞凋亡作用。