生物法合成香兰素和香草酸的研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:yibola2008
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生物法合成香兰素和香草酸,具有污染少、生产清洁、安全,副产物无污染等优点,已越来越受到人们的重视。国外很多公司都纷纷加强了对生物法生产香兰素和香草酸的研究,我国在这方面尚处于起步阶段,因此有必要加大合作研究的力度,以使我国在生物合成香兰素市场上能占有一席之地。本文主要对酶转化法和微生物转化的方法转化异丁香酚或者阿魏酸生产香草酸和香兰素进行了研究。1、经过重复试验确定,实验室现有的几种脂肪酶Novozyme435,Candida sp.99-125脂肪酶,LipozymeTL IM,LipozymeRM IM并不能够催化异丁香酚转化生成香兰素,因此,在从异丁香酚到香兰素的转化过程中可能并不存在酯化或者转酯化反应;2、提取得到的大豆脂氧合酶LOX酶活不高,且在低温下(20℃)相对比较稳定,当用LOX粗提液或者用共沉淀法制得的酶粉催化异丁香酚反应时,间隔取样,测定,没有新峰出现,底物异丁香酚也没有消耗,说明该反应体系仍然存在问题,因此需要从微生物中寻找合适的酶;3、在转化异丁香酚生产香草酸和香兰素的菌株筛选实验中,最初筛到3株可以产香兰素的链状菌株,但是香兰素的产量非常低,进行重复实验,3株菌的发酵液中均未检测到香兰素的生成,这可能是所筛到的菌株性状不稳定,使得其转化异丁香酚生成香兰素的能力下降;同时,异丁香酚对菌体有毒性作用,且在发酵液反应过程中容易出现乳化现象,使得微生物酶不能和底物更好接触,不利于反应的进行,因此选用对微生物毒性相对较小的阿魏酸为底物进行筛选;4、在转化阿魏酸生产香草酸和香兰素的菌株筛选实验中,筛选到一菌株StrainAl,在未优化反应条件的情况下,该菌株经27h即可将1g/L,阿魏酸转化反应生成0.36g/L香草酸,其相应的摩尔转化率为41.6%;5、对链霉菌Streptomyces2036进行紫外诱变,复筛,仅有微量香兰素生成,浓度约为2.1mg/L,但该菌株可以在短时间内转化阿魏酸生成香草酸;6、链霉菌Streptomyces 2036,能将阿魏酸转化为香草酸。通过培养基和发酵条件的优化,确定较适培养条件为:葡萄糖5g/L,酵母粉5g/L;最佳发酵条件为:pH 5.0,摇瓶装液量50mL/250mL,转速130r/min,发酵温度30℃。在该条件下,链霉菌可在转接培养16h后添加阿魏酸溶液,经12h可将1g/L的底物阿魏酸转化为0.261g/L的香草酸,摩尔转化率为30.2%,合成香草酸的酶主要以胞内酶的形式存在。
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