目的:近年来,脑卒中已成为威胁人类生命和健康的重要元凶之一。接近80%的缺血性脑卒中由血栓形成所致的颅内动脉闭塞引起,因此,颅内已闭塞血管的再通是卒中治疗的有效手段。缺血脑组织得到再灌注的同时带来了缺血再灌注损伤,包括血脑屏障的破坏、脑水肿等。缺血性脑卒中的病理过程很复杂,涉及到兴奋性谷氨酸毒性、氧化应激、离子失衡、炎症、凋亡等等。继发性脑损伤产生的一系列级联反应均导致血脑屏障的破坏,继而加重脑水肿。白藜芦醇苷已有报道其具备对心肌细胞、小肠缺血再灌注损伤有保护作用,同时越来越多的研究证明白藜芦醇苷具有抗氧化应激、抗炎、抗凋亡的作用,然而其在保护血脑屏障方面的研究甚少。本实验的研究通过白藜芦醇苷干预小鼠脑缺血再灌注模型的方式,探讨白藜芦醇苷对脑缺血再灌注后的血脑屏障是否具有保护作用及其可能的潜在保护机制。方法:线栓法利用成年雄性CD-1(25-30g)小鼠制备短暂性大脑中动脉闭塞(t MCAO)模型。随机将实验动物分成4组:假手术组(Sham+等体0.9%氯化钠溶液),缺血再灌注组(t MCAO+等体0.9%氯化钠溶液组),白藜芦醇苷低剂量组(t MCAO+白藜芦醇苷30 mg/kg),白藜芦醇苷高剂量组(t MCAO+白藜芦醇苷60 mg/kg)。白藜芦醇苷在脑缺血再灌注模型造模成功后立即腹腔注射给药。于模型建立24小时后应用行为学评分评价神经功能缺损情况、TTC染色法测定脑梗死体积、激光散斑多普勒血流仪测定脑血流灌注、干湿重法检测脑水肿程度、伊文思蓝染色判定血脑屏障渗透性变化、Western Blot、免疫荧光检测内皮细胞标志物CD-31、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5及Cav-1的表达情况。结果:1白藜芦醇苷改善行为学评分:对假手术组、缺血再灌注组、白藜芦醇苷低剂量组、白藜芦醇苷高剂量组小鼠于术后24小时进行神经功能评分。缺血再灌注组、白藜芦醇苷低剂量组和白藜芦醇苷高剂量组小鼠均出现不同程度的左侧肢体肌力下降,假手术组小鼠无明显神经功能缺损表现。与缺血再灌注组相比,白藜芦醇苷高剂量组的行为学评分得到明显改善,且存在统计学差异(P<0.05)。白藜芦醇苷低剂量组的行为学评分低于缺血再灌注组,但差异无统计学意义(P>0.05)。据此,我们之后的研究主要讨论白藜芦醇苷高剂量组(60mg/kg)作为白藜芦醇苷干预组的作用。2白藜芦醇苷降低了脑梗死体积:假手术组未见梗死灶。缺血再灌注组、白藜芦醇苷组均可见白色梗死灶,与缺血再灌注组比较,白藜芦醇苷组在干预24小时后明显降低了梗死体积,有统计学意义(t MCAO vs.PD:57.95%±9.86%vs.32.93%±15.16%,P<0.05)。3脑血流测定:病灶侧再灌注1小时后脑血流明显增加,24小时后脑血流进一步增加,趋向基线水平。再灌注1小时缺血再灌注组与白藜芦醇苷组血流均得到一定的恢复,两者相比较无统计学意义。相较缺血再灌注组,白藜芦醇苷组术后24小时脑血流量有增高的趋势,而并无统计学意义(PD vs.t MCAO:78.7%±14.8%vs.65.5±7.2%,P>0.05)。4白藜芦醇苷减轻了脑水肿的程度:缺血再灌注24小时后,通过干湿重法测定小鼠病灶侧半球脑含水量:白藜芦醇苷组水肿程度明显小于缺血再灌注组,差异有统计学意义(PD vs.t MCAO:81.11%±4.42%vs.86.72%±3.55%,P<0.05)。5白藜芦醇苷减少了伊文思蓝渗出:假手术组无伊文思蓝渗出,血脑屏障完整;缺血再灌注组、白藜芦醇苷组在缺血再灌注24 h后均有伊文思蓝渗出,其中白藜芦醇苷组相较缺血再灌注组伊文思蓝渗出量明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。6白藜芦醇苷对ZO-1、Occludin、Claudin-5、Cav-1表达的影响:Western blot结果显示:模型建立24小时后,与假手术组相比,ZO-1、Occludin、Claudin-5三项指标在缺血再灌注组及白藜芦醇苷组均有明显的降低,而白藜芦醇苷组相较缺血再灌注组有明显的上调(P<0.05)。Cav-1在缺血再灌注后表达增加,白藜芦醇苷相较缺血再灌注组明显下调其表达(P<0.05)。7白藜芦醇苷对CD-31、ZO-1、Claudin-5在缺血半暗带区分布的影响:免疫荧光结果显示:白藜芦醇苷组上调了CD-31在皮层缺血半暗带区的表达,并且可见微血管形态更加光滑、完整,而缺血再灌注组可见微血管曲折、破碎,结构破坏明显。同时,白藜芦醇苷组在术后24小时皮层缺血半暗带区明显降低了ZO-1、Claudin-5分布的破坏程度。结论:本实验表明白藜芦醇苷干预缺血再灌注损伤小鼠能够改善神经功能、减少梗死面积、减轻脑水肿;对因缺血再灌注损伤所致的血脑屏障破坏,白藜芦醇苷能够降低血脑屏障渗透性,保护内皮细胞,上调紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5的表达水平,下调Cav-1的表达水平,起到一定的保护血脑屏障的作用。