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本研究采用细胞培养、台盼蓝染色、DAPI和TUNEL染色、RNA干扰、Western blot分析等细胞分子生物学技术和方法,以PC12细胞和小鼠原代神经元为实验对象,研究了白藜芦醇对镉诱导神经细胞凋亡的影响,深入探讨白藜芦醇靶向mTOR信号转导抗镉诱导神经细胞凋亡和S6K1在此过程的重要作用。结果如下:1白藜芦醇通过抑制Akt/mTOR通路抗镉诱导神经细胞凋亡PC12细胞和小鼠原代神经元用白藜芦醇(100 μM)预处理1 h后暴露于镉(10和20 μM ) 8 h或24 h。Western blot分析Akt/mTOR通路相关蛋白表达;台盼蓝和DAPI染色分别分析活细胞数量和凋亡细胞表现。结果显示:镉以浓度依赖的方式诱导神经细胞Akt、mTOR、S6K1、S6、4E-BP1磷酸化增加,这被白藜芦醇有力地阻滞;与之一致的,白藜芦醇显著减低镉诱导神经细胞活性下降和凋亡。这些结果表明白藜芦醇抑制Akt/mTOR通路抗镉诱导神经细胞凋亡。2白藜芦醇靶向mTOR信号转导抗镉诱导神经细胞凋亡以PC12细胞和小鼠原代神经元为实验对象,细胞用雷帕霉素(200ng/ml)预处理48h后再用白藜芦醇(1000μM)预处理1h,接着暴露于镉(10 μM)8h或24 h。Western blot分析相关蛋白表达;台盼蓝和TUNEL染色分别分析活细胞数量和凋亡细胞表现。结果显示:雷帕霉素强化白藜芦醇抑制镉诱导Akt、mTOR、S6K1、4E-BPI磷酸化和Cleaved-caspase-3增加;与之一致的,雷帕霉素也有效增强白藜芦醇抵抗镉诱导神经细胞活性下降以及TUNEL阳性细胞升高。这些结果表明白藜芦醇靶向mTOR信号转导抗镉诱导神经细胞凋亡。3 S6K1在白藜芦醇抗镉诱导神经细胞凋亡中有重要作用分别感染Ad-S6K1-ca和Ad-LacZ(作为对照)的PC12细胞用白藜芦醇(100μM)或 PP242 (1 μM)预处理 1 h 后暴露于镉(10 μM) 8 h 或 24 h。Western blot分析相关蛋白表达;台盼蓝和TUNEL染色分别分析活细胞数量和凋亡细胞表现。结果显示:持续激活S6K1表达不影响Akt磷酸化表现,但能够提高基础和镉诱导的S6K1、S6磷酸化和Cleaved-caspase-3表达,并抵抗白藜芦醇或PP242抑制镉诱导这些事件;与之一致的,持续激活S6K1表达增加镉诱导神经细胞活性下降和凋亡,且明显抵抗白藜芦醇或PP242抑制活性。这些结果表明S6K1在白藜芦醇抗镉诱导神经细胞凋亡中有重要作用。