本课题以E.coli DH5α为质粒pVAXON-hCGβ的宿主菌，采用单因素实验考察培养基基本组分碳源、C:N比、磷酸盐对质粒含量的影响，并运用响应面设计法对上述培养基组分进行优化，得出适合质粒生产的最佳培养基配方。考察糖酵解抑制剂、生长抑制剂和蛋白合成抑制剂及其添加时间对质粒含量的影响。　　 实验结果表明：采用响应面实验设计法，可使摇瓶质粒产量达到16.83mg/L，是未优化前的3.3倍。在菌体对数生长中后期向改良的PDM培养基中添加3g/L柠檬酸钠可使质粒含量提高24.3％；同样在菌体对数生长后期向改良的PDM培养基中添加120mg/L氟化钠可使质粒含量提高57％。加入2g/L乙醇后，由于其能够降低水活度和乙醇本身的毒性对菌体生长产生抑制作用，导致生长速率的减小，质粒含量提高了32％。与乙酸对重组蛋白表达时的抑制作用相反，重组大肠杆菌高密度发酵生产质粒DNA的过程中添加2.2g/L乙酸可使质粒含量提高15％，说明乙酸浓度可能并非主要的限制条件。向改良的PDM培养基中添加0.1g/L链霉素，可以抑制蛋白质表达，使培养基中更多的营养成分用于DNA合成。　　 同时在摇瓶实验中，从代谢合成途径考虑，考察了质粒复制的前体物质氨基酸对质粒含量的影响。结果表明：分别向改良的PDM培养基中添加三种氨基酸：谷氨酰胺、甘氨酸、天冬氨酸能够抑制质粒的复制。考察培养条件对质粒含量的影响，结果表明7.2是重组大肠杆菌产质粒的最佳PH值。采用两步升温诱导法的升温策略，使质粒含量比在37℃中培养时提高了18％。