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本研究应用染色体显带技术和荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)技术,对四种扇贝染色体进行了细胞遗传学分析;对栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝,栉孔扇贝和海湾扇贝杂交F1进行了基因组荧光原位杂交(GISH)分析。主要结果如下:1.分析了C带,Ag-NOR带,DAPI带在扇贝染色体上的分布。C带显示海湾扇贝所有染色体上都存在阳性带,主要位置为着丝粒区、末端区和中间区。海湾扇贝的DAPI带结果与C带结果相似,阳性带主要位于末端区和中间区。虾夷扇贝的DAPI阳性带位置则主要存在于着丝粒区,没有发现末端区和中间区的阳性带。Ag-NOR结果显示海湾扇贝NOR数目为4,位于第3对亚端部着丝粒染色体的短臂端部和第10对端部着丝粒染色体的短臂端部;栉孔扇贝的NOR数目为2,位于第10对亚端部着丝粒染色体短臂端部;另外在栉孔扇贝中发了一个特别的分裂相,除了第10对亚端部着丝粒染色体出现银染点,第12对亚端部着丝粒染色体的短臂端部亦出现银染点。2.研究了重复序列-rDNA的定位(1) 18S-28S rDNA在栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝中只有一个位点,而在虾夷扇贝和海湾扇贝中有两个位点。栉孔扇贝的18S-28S rDNA定位在第10对亚端部着丝粒染色体短臂的端部,未发现额外的信号位点;华贵栉孔扇贝的18S-28S rDNA定位到第1对中部着丝粒染色体的着丝粒位置处,揭示了华贵栉孔扇贝在进化过程中可能发生过罗伯逊融合,这条长的中部着丝粒染色体是由两条端部或亚端部着丝粒染色体融合而成。虾夷扇贝的18S-28S rDNA定位到了第11对和第13对亚端部着丝粒染色体的短臂端部,海湾扇贝的18S-28S rDNA定位到第3对亚端部着丝粒染色体的短臂和第10对端部着丝粒染色体的短臂。一般认为rDNA的数目随着物种的进化由少变多。虾夷扇贝和海湾扇贝的两个18S-28S rDNA位点可能是进化过程中发生18S-28S rDNA复制产生的。因此推测在分析的这四种扇贝中,栉孔扇贝的进化地位是最古老的。(2) 5S rDNA在栉孔扇贝和虾夷扇贝中有一个位点,在海湾扇贝中有两个邻近的位点。栉孔扇贝中,5S rDNA的杂交信号位于第10对亚端部着丝粒染色体的长臂中间。虾夷扇贝的5S rDNA定位在第15对亚端部着丝粒染色体的长臂中间。海湾扇贝5S rDNA在第11对端部着丝粒染色体的长臂中间有邻近的两簇信号位点。Wang和Guo(2004)的结果显示海湾扇贝的5S rDNA位于一对端部着丝粒染色体的长臂中间,有一个信号位点。本文的结果与之略有不同,5S rDNA在染色体上存在两个邻近的位点。推测这种差异可能是由染色体的凝缩程度不同导致,染色体上存在两簇距离很近的5S rDNA,如果染色体凝缩得比较厉害,则两簇5S rDNA信号靠在一起,被误认为是一个5S rDNA位点,这种情况在我们的实验中也观察到。(3)应用顺序-荧光原为杂交将18S-28S rDNA和5S rDNA定位到同一个染色体分裂相,检测两种rDNA在染色体上的位置关系。结果显示:海湾扇贝的两种核糖体DNA定位在3对不同的染色体上。虾夷扇贝的18S-28S rDNA和5S rDNA同样位于不同的染色体上。3.脊椎动物端粒序列(TTAGGG)n的染色体定位脊椎动物端粒序列(TTAGGG)n的FISH信号定位到栉孔扇贝,虾夷扇贝和海湾扇贝所有染色体的端粒区域,没有发现中间信号的存在,说明该三种扇贝近期的染色体没有发生重排或者末端融合。另外我们发现端粒信号的强度有所差异,这种差异既表现在同一条染色体的两条姊妹染色单体之间,也表现在不同的染色体之间。4.杂交扇贝子代染色体构成分析利用GISH方法对栉孔扇贝♀×华贵栉孔扇贝♂子代幼虫进行了检测,结果表明子代中超过74%的分裂相含有35条染色体。利用华贵栉孔扇贝基因组探针作杂交,分裂相中有16条染色体被稳定地涂染成绿色,符合华贵栉孔扇贝亲本染色体的单套数目(n=16);利用栉孔扇贝基因组探针作杂交时,分裂相中有19条染色体被涂染成绿色,也符合栉孔扇贝亲本染色体的单套数目(n=19)。实验中我们没有发现明显的染色体丢失、断裂及重组等现象,也没有发现单倍型的染色体分裂相(n=16或n=19)的出现。但我们检测到了约1-2%异源多倍体的分裂相,GISH分析后发现这些分裂相是由单倍的华贵栉孔扇贝的染色体和多倍的栉孔扇贝染色体组成,比如论文中图示了一个异源四倍体的分裂相,它是由单倍的华贵栉孔扇贝的染色体(n=16)和三倍的栉孔扇贝染色体(3n=57)组成。对栉孔扇贝♀×海湾扇贝♂子代幼虫进行GISH检测,68%的分裂相显示35条染色体。利用栉孔扇贝基因组探针做杂交时,分裂相中有19条染色体被稳定的涂染成黄绿色,符合栉孔扇贝亲本染色体的单套数目(n=19);利用海湾扇贝基因组作杂交时,分裂相中有16条染色体被涂染成黄绿色,也符合海湾扇贝亲本染色体的单套数目(n=16)。我们可以下这样的定论,大多数子代的担轮幼虫的染色体构成仍然符合理论预期型(2n=3m+5sm+15st+12t),即其基因组染色体是由亲本扇贝的单套基因组染色体构成的,子代分别继承了母本和父本各一套染色体。