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小麦抗叶锈基因Lr38来源于中间偃麦草(Agropyron intermedium),位于其第七组的一条染色体上,并被标定在6DL上。Lr38是抗性很强的抗病基因,国内外至今尚未发现对它表现毒性的菌株存在,是一个应用潜力很大的由主效基因控制的抗病基因。目前还没有Lr38基因分子标记的报道。因此,找到与Lr38抗病基因完全连锁或紧密连锁的分子标记,对于该抗病基因的分离、利用具有重要意义。 本研究借助于AFLP技术,以Thatcher为感病对照,利用15小麦抗叶锈近等基因系(NILs)和F2代(ThLr38×Thather)进行分析,结果如下: 1.采用210对AFLP引物分析了小麦抗叶锈基因Lr38在15个小麦抗叶锈近等基因系间的多态性,大多数引物能扩增出清晰可辩的条带。经过初次筛选,选出63对能在近等基因系间揭示出小麦抗叶锈基因Lr38多态性的引物组合,多态性引物出现比率为30%。 2.用筛选到的63对引物在ThLr38×Thatcher杂交的127株F2代群体中扩增,筛选到2个引物组合在抗感植株间存在特异性差异,进而对127株F2代群体进行扩增,并用MAPMAKER3.0软件分析,国际首次获得2个与抗叶锈病性状紧密连锁的AFLP分子标记:P-AGC/M-CAG193bp(0.80cM)和P-ACG/M-CTG355bp(0.80cM);1个与感叶锈病性状连锁的AFLP分子标记:P-AGC/M-CAG230bp(4.80cM)。该研究成果为进一步进行分子辅助育种及构建遗传图谱、物理图谱和基因的克隆奠定了基础。 3.研究过程中,对银染试剂的使用进行了改进,在保证染色质量的同时,10%的脱色液可以重复使用3~4次;当两次银染时间间隔20~30min时,染色液和显影液可以重复使用一次,使改进后的银染既保真又经济。