本论文的主体内容拟解决以下问题： (1)撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时，c-Jun主要与ATF2还是c-Fos形成二聚体? (2)这个二聚体对凋亡是否必需? (3)ATF2与c-Fos在c-Jun介导的神经元凋亡中的作用如何? 结论: 1.撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时，c-Jun主要和ATF2形成二聚体； 2.c-Jun／ATF2二聚体对凋亡的发生起重要作用； 3.c-Fos下调促使c-Jun／ATF2二聚体形成及凋亡发生。 研究表明当神经元遭受凋亡刺激时CDKs(Cyclin dependent kinases)被激活。例如，撤营养因子诱导细胞凋亡时，cyclin D和cyclin B表达水平会升高，CDK2／4被激活。在阿耳茨海默(氏)病(Alzheimers disease，AD)、脑缺血等病症中，细胞周期蛋白的表达水平明显升高。在低钾诱导的CGNs凋亡和DNA损伤引起的神经元凋亡中cyclinD1和其相关的细胞周期素依赖的蛋白激酶活性也发现上调。CDKs抑制剂如Roscovitine，Olomoucine，Gw8150等和过表达负显性的CDK4／6可有效抑制撤钾、DNA损伤和β-amyloid等刺激诱导的凋亡，说明CDKs在神经元凋亡中发挥重要作用。 作为CDKs下游的转录分子，E2F1在多种刺激诱导的神经元凋亡过程中表达上调。过表达E2F1诱导了神经元凋亡，反之，负显性E2F1和反义核苷酸能有效保护神经元，说明E2F1的转录激活对神经元凋亡是必需的。 但是，另一些报道称当神经元遭受DNA损伤等凋亡刺激时，会使含有E2F1的抑制复合物从促凋亡靶基因启动子上解离，解除抑制的促凋亡基因表达上调进而引发凋亡，这说明E2F1介导的促凋亡基因的抑制作用对维系神经元存活起了关键作用。 因此，E2F1在决定神经元死活中的作用尚有争议。 本部分研究利用敲除鼠、小分子干扰等技术，检测E2F1在撤钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡过程中的作用。 撤钾诱导E2F1表达为了检测撤钾处理CGNs时E2F1是否表达上调，我们将体外培养7天的E2F1+/+ CGNs进行25K，5K处理不同的时间点(2、4、6小时)。RT-PCR和Western blotting结果显示撤钾时e2f1的mRNA和蛋白质表达水平都增高。 敲除E2F1没有改变凋亡进程将体外培养7天的E2F1+/+ CGNs和E2F1-/- CGNs进行25K、5K处理不同的时间点(6、8、12、24小时)，然后用Hoechst 33258核染色，计数不同时间点E2F1+/+ CGNs和E2F1-/- CGNs核固缩的百分率。统计结果表明，同一时间点E2F1+/+ CGNs和E2F1-/- CGNs在撤钾时的凋亡率并没有显著性差异。 我们的结果与多家实验室利用敲除鼠或其它手段干预E2F1功能保护神经元的结果并不一致。造成这种差异的可能原因是这些实验室进行25K、5K处理时加入了透析血清，血清有可能改变E2F1在凋亡中的作用。于是我们将处理CGNs的25K、5K培养基里加入了10％的透析血清。统计结果表明在血清条件下撤钾诱导的E2F1+/+ CGNs和E2F1-/- CGNs的凋亡率依然没有差异。 为了检测撤钾处理的E2F1-/- CGNs是否会表现出滞后的caspase-3激活，我们将E2F1+/+ CGNs和E2F1-/- CGNs用25K、5K培养基分别处理2h、4h和8h后，检测caspase-3的活化情况。结果表明，和对照组神经元相比，E2F1-/- CGNs凋亡时caspase-3的活化并没有延迟。因此，这些结果一致支持敲除E2F1并不影响撤钾诱导CGNs凋亡。沉默E2F1的表达不影响撤钾诱导的凋亡我们在NIH3T3细胞中证实两个e2f1干扰质粒she2f1a和she2f1b能有效沉默异位表达的外源小鼠源E2F1的表达,在CGNs中这两个e2f1 shRNA干扰质粒能有效抑制过表达E2F1激活的6×E2F-luc报道基因活性。但统计结果表明干扰E2F1表达并没有抑制神经元凋亡。这个结果进一步支持E2F1缺失不影响撤钾诱导的神经元凋亡进程。 结论 E2F1对撤钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡必需。