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第一部分红景天对大鼠心肌梗死后心肌血管新生的影响及对CRLR表达的调节作用目的：1明确红景天具有促进大鼠缺血心肌血管新生作用。2观察红景天对心肌梗死后大鼠心肌AM及CRLR表达的影响。3观察红景天对心肌梗死后大鼠血浆AM浓度的影响。4比较红景天和红景天苷促血管新生及对AM途径的作用。方法：1准备干预药物大花红景天水提、浓缩、干燥制成干粉,高效液相色谱-紫外检测法测得每克红景天干粉含有8.3毫克红景天苷；以蒸馏水溶解红景天干粉至浓度为6%(w/w),红景天苷干预浓度按照红景天干预浓度×0.83%来计算,即保证红景天与红景天苷干预溶液所含红景天苷浓度相等。2动物分组和干预处理Wistar雄性大鼠21只,随机分为5组：生理盐水(NS)组、红景天(HJT)组、红景天苷(HJTG)组各5只,假手术(SHAM)组、正常对照(CON)组各3只；前三组进行心肌梗死造模,造模前7天预灌相应药物,每日灌胃2m1,药物干预持续至造模后7天,SHAM组和CON组只进行普通饲养；手术后7天各组大鼠取血浆标本并处死留取心脏标本。3检测指标免疫组化法检测梗死边缘区和非梗死区CD31表达情况,计算微血管密度计数(MVD); SYBR Green实时定量PCR技术检测大鼠心肌AM、CRLR mRNA水平；Western Blot法检测大鼠心肌AM、CRLR的蛋白水平；ELISA法检测大鼠血浆AM水平。结果：1红景天有肯定的促缺血心肌血管新生作用：以CD31阳性计算的MVD, HJT组梗死边缘区(92.8421±4.35031)高于HJTG组梗死边缘区(78.1754±3.43033)高于NS组梗死边缘区(70.7368±4.14689),差别均有统计学意义；HJT组、HJTG组、NS组三组非梗死区之间及它们与SHAM组、CON组MVD均无显著差别；HJT组、HJTG组、NS组三组MVD梗死边缘区均高于非梗死区,差别有统计学意义。2红景天促进心肌AM和CRLR mRNA表达,以RQ(2-(ΔΔCT))值表示PCR结果,以SHAM组为对照(RQ=1),HJT组AM (7.914±2.043)、CRLR(3.927±1.685)的表达均高于NS组AM(4.252±2.924)、CRLR(1.786±0.702)和CON组的AM(0.933±0.429)、CRLR (1.024±0.337); HJT组AM表达高于HJTG组(7.371±3.890)又高于NS组和CON组,HJT组CRLR表达高于HJTG组(2.859±1.484),HJTG组高于NS组,但后者差距不显著。3红景天促进AM及CRLR蛋白表达,以目标基因/β-actin灰度比来表示检测结果,HJT组AM (1.060±0.095)、CRLR (1.137±0.146)表达均高于HJTG组AM (0.837±0.057)、CRLR(0.907±0.045)及NS组AM(0.523±0.093)、CRLR(0.807±0.040),又高于SHAM组AM(0.387±0.021)、CRLR(0.673±0.023)和CON组AM (0.410±0.128)、CRLR(0.607±0.184)其中除HJT组与HJTG组CRLR表达的差别P=0.06外,其他均有显著的统计学意义。4红景天干预对心梗后大鼠血浆AM水平无明显影响,ELISA实验所得AM血浆水平NS组(28.55±3.49)、HJTG组(30.40±3.44)、HJT组(32.28±5.13)较SHAM组(21.15±3.83)和CON组(20.70±4.13)均增高,差别有统计学意义,但NS、HJTG、HJT三组之间无明显差别。结论：1红景天在大鼠心肌梗死模型中有明确的促缺血心肌血管新生作用,并伴随着心肌AM、CRLR mRNA和蛋白水平表达的增高。2红景天苷也有明确的促血管新生作用及对心肌AM、CRLR表达的上调,但作用弱于红景天。3红景天对心肌梗死大鼠血浆AM水平无明显影响,可能红景天对AM的促进作用主要局限于心肌局部。第二部分红景天对低氧条件下HUVECs表达AM、CRLR的调节作用及其机制研究目的：1明确红景天具有促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的作用。2观察低氧条件下红景天对HUVECs表达AM及CRLR的影响。3比较低氧条件下红景天和红景天苷促细胞增殖及对AM途径的作用。4了解低氧条件下红景天对HUVECs AM和CRLR表达的调节作用是否依赖于HIF-1α途径。方法：实验一CCK8法检测HUVECs增殖情况,并确定红景天干预的最佳浓度和时间：将HUVEC细胞分红景天(HJT)组、红景天苷(HJTG)组和正常对照(CON)组,选取6个不同的红景天及相应红景天苷干预浓度,计算干预24、48、72小时后的细胞增殖率。实验二HUVECs细胞分为4组：正常氧对照(N)组、单纯低氧(H)组、低氧红景天(H+HJT)组、低氧红景天苷(H+HJTG)组；干预24小时后,SYBR Green实时定量PCR技术检测HUVECs表达AM、CRLRmRNA水平；Western Blot法检测HUVECs表达AM、CRLR的蛋白水平。实验三(一) HUVECs细胞分为3组：正常氧对照(N)组、单纯低氧(H)组、低氧红景天(H+HJT)组；干预24小时后,SYBR Green实时定量PCR技术检测HUVECs表达HIF-1αmRNA水平；Western Blot法检测HUVECs表达HIF-1α的蛋白水平；(二)1.使用流式细胞仪检测荧光标记siRNA (FAM-siRNA)转染效率；2.应用阳性对照siRNA (GAPDHsiRNA)进一步摸索RNA干扰实验条件,SYBR Green实时定量PCR技术检测各组HUVECs表达GAPDH mRNA水平；3.分组干预HUVECs:N组、H组、H+HJT组,每组又分设空白对照(CON)、转染剂对照(MOCK)、转染阴性对照siRNA (NEG)、转染HIF-1αsiRNA(HIF)4个亚组；干预后SYBR Green实时定量PCR技术检测HUVECs表达HIF-1α、AM、CRLR mRNA水平：Western Blot法检测HUVECs表达HIF-1α、AM、CRLR的蛋白水平。结果：实验一CK8法测定的细胞增殖率由吸光度OD值计算而来,细胞增殖率(%)＝实验组OD值一空白组OD值／对照组OD值一空白组OD值×100%；红景天和红景天苷都有明确的促细胞增殖作用,作用随浓度时间变化基本一致,过高浓度反而抑制细胞生长(>50ug/ml),其中HJT组干预24小时细胞增殖为CON组的1.91倍,作用最强,为最佳干预条件；实验二(1)红景天及红景天苷促进低氧条件下HUVECs AM和CRLR mRNA表达：以RQ(2-(ΔΔCT))值表示PCR结果,以N组为对照(RQ=1),H+HJT组AM(11.917±1.145)、CRLR (3.451±0.202)的表达均高于H+HJTG组AM (6.928±1.028)、CRLR (2.573±0.297),后者又高于H组的AM (2.322±0.740)、CRLR (1.481±0.326),差距都有统计学意义；所有低氧组均高于N组,差距亦有统计学意义。(2)低氧条件下红景天及红景天苷促进HUVECs AM及CRLR蛋白表达：以目标基因/β-actin灰度比来表示检测结果,H+HJT组AM(0.963±0.110)、CRLR(0.860±0.029)表达均高于H+HJTG组AM (0.753±0.054)、CRLR (0.620±0.160),后者又高于H组AM(0.628±0.066)、CRLR (0.300±0.044),所有低氧组均高于N组AM(0.400±0.046)、CRLR (0.183±0.015),差异均有显著的统计学意义。实验三(1)红景天促进低氧条件下HUVECs HIF-la mRNA和蛋白表达：H+HJT组HIF-1αmRNA和蛋白表达均高于H组,后者又高于N组,三组差距均有统计学意义。(2)a.流式细胞仪检测结果显示FAM-siRNA转染HUVECs转染效率在siRNA、转染剂RNAi-Mate比例为3：1时最高,约85%左右：b. GAPDH siRNA转染细胞后,以RQ (2-(ΔΔCT))值表示PCR结果,与阴性对照siRNA相比,相应浓度的GAPDH siRNA转染后,GAPDH mRNA表达被显著抑制,差异具有统计学意义,其中60nM组抑制作用最明显；c. RNAi实验结果：以RQ(2-(ΔΔCT))值表示PCR结果,以目标基因/β-actin灰度比来表示Western Blot结果。A. mRNA水平：与CON组相比,各组MOCK组、NEG组对细胞HIF-1α、AM、CRLR mRNA表达没有明显影响,差异无统计学意义,与CON组、MOCK组、NEG组相比,转染HIF-1αsiRNA各组细胞HIF-1α、AM、CRLR mRNA表达均受到显著抑制(P均<0.05)；组间比较发现,以正常氧NEG组为对照,转染HIF-1αsiRNA后,N组、H组和H+HJT组细胞HIF-1α、AM、CRLR mRNA表达均受到明显抑制,其中H+HJT组HIF-1α(0.48±0.32)、AM (0.28±0.07)、CRLR (0.42±0.23)较H组HIF-1α(0.24±0.12)、AM (0.24±0.14)、CRLR (0.28±0.09)和N组HIF-1α(0.18±0.13)、AM (0.17±0.14)、CRLR (0.21±0.07)水平有所升高,但差异没有统计学意义。B.蛋白水平：与CON组相比,各组MOCK组、NEG组对细胞HIF-1α、AM、CRLR蛋白表达没有明显影响,差异统计学意义,与CON组、MOCK组、NEG组相比,转染HIF-1αsiRNA各组细胞HIF-1α、AM、CRLR蛋白表达均受到显著抑制(P均<0.05)：组间比较发现转染HIF-1αsiRNA后,N组、H组和H+HJT组细胞HIF-1α、AM、CRLR蛋白表达均受到明显抑制,H+HJT组HIF-1α(0.061±0.016)、AM (0.233±0.106)、CRLR (0.108±0.066)较H组HIF-1α(0.036±0.029)、AM (0.183±0.144)、CRLR (0.066±0.011)和N组HIF-1α(0.016±0.007)、AM (0.137±0.064)、CRLR (0.045±0.026)水平差异没有统计学意义。结论：1红景天有促进HUVECs增殖作用,低氧条件下同时伴随着HUVECs AM及CRLRmRNA和蛋白水平表达的增高。2红景天苷也有明确的促HUVECs增殖作用及促进HUVECs表达AM、CRLR的作用,但弱于红景天。3红景天促进HUVECs表达HIF-1αmRNA和蛋白。4采用siRNA干扰HIF-1α表达后,红景天对AM和CRLR的促进作用基本被消除,这说明低氧情况下红景天对AM途径的作用依赖于其对HIF-1α表达的调节。