食用菊品种类病毒脱毒体系建立和优化

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菊花(Chrysanthema morifolium(Ramat.)Tzvel.)是菊科菊属多年生的宿根草本花卉。菊花是中国十大名花之一,花中四君子之一,同时也是世界四大切花之一,在食用价值和经济价值上对人类有很大的奉献,同时还具有很高的观赏价值。植物病毒作为世界上第二大病原,传播感染率仅次于真菌,病毒的传播与扩散无法从种植源头得到控制,病毒由于长期的无性繁殖也会在植物体内积累,导致菊花种性退化、产量降低、品质变差等后果。因此有必要通过组织培养等手段脱除菊花体内的病毒,以促进菊花的工业化生产,扩大经济效益。本论文以茎尖培养法为主要研究方法,结合脱落酸(ABA)和病毒唑处理等手段,探讨不同的处理手段对菊花脱毒效果的影响,以探索适合菊花脱毒的有效方法。1、结合‘白球’、‘黄球’和‘紫凤牡丹’的田间症状的表现,通过巢式PCR技术检测出‘白球’感染了菊花矮化类病毒(CSVd),侵染‘黄球’的病毒是菊花褪绿斑驳类病毒(CChmvd);‘紫凤牡丹’感染了菊花褪绿斑驳类病毒(CChmvd)和菊花矮化类病毒(CSVd)。在实验室前期工作基础上,设置4组不同病毒唑浓度的MS培养基,筛选出三个品种出愈率较高和褐化率较低病毒唑浓度为30 mg/L。对‘白球’无菌苗进行不同浓度的ABA预处理,发现当ABA浓度为20mg/L时,菊花的植株生长情况最佳。通过一次茎尖分生组织培养、病毒唑结合茎尖分生组织低温培养和ABA结合茎尖分生组织培养3种脱毒方法,对3种食用菊不同处理的病毒脱除率进行统计分析发现,3个品种在ABA预处理结合茎尖分生组织培养的茎尖脱毒率都最高,‘白球’、‘黄球’和‘紫风牡丹’脱毒率分别为25%、66.67%和60%,最终获得9株‘黄球’脱毒苗,4株‘白球’脱毒苗和6株‘紫凤牡丹’脱毒苗。2、3D8scFv是一种具有RNA水解功能和细胞渗透功能的重组抗体,已成功用于菊花CSVd抑制研究。在建立‘丰香’茎段再生体系,确定了最适激素配比和抗生素选择浓度基础上,以‘丰香’无菌苗带芽点的茎段为转化材料,采用农杆菌介导法,将pORE-R4-1×35s-3D8 scFv转化‘丰香’,初步获得了转化抗性植株,为进一步研究奠定了基础。
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