目的：本研究拟建立体外分离培养人乳牙破牙细胞(odontoclast，OD)的方法，检测谷氨酸受体(glutamate receptors)NR1、NR2B及GluR1在破牙细胞中的表达和分布；观察NMDA受体拮抗剂革西平马来酸盐(MK801)对破牙细胞内Ca2+浓度变化及硬组织吸收活性的影响。 方法：①收集儿童滞留乳牙，分别采用机械分离法、酶消化法及机械加酶消化法行破牙细胞分离培养。倒置显微镜、苏木素—伊红(Hematoxylin and Eosin，HE)染色观察细胞形态学特征，抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate—resistant acid phosphatase，TRAP)染色鉴定破牙细胞，扫描电镜(scanning electron microscopy，SEM)观察破牙细胞吸收陷窝。②免疫细胞化学技术，检测谷氨酸受体NR1、NR2B及GluR1在人乳牙破牙细胞的分布及表达情况。③Fluo—3 AM荧光探针标记细胞内Ca2+，激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscopy，LSCM)动态检测不同条件下破牙细胞内Ca2+浓度水平变化。④异硫氰酸荧光素—鬼笔环肽(Phalloidin—FITC)标记破牙细胞骨架，观察MK801对破牙细胞肌动蛋白环(F—actin ring)形成的影响。 结果：①与单纯机械分离或酶消化法相比，机械加酶消化法可获得较多破牙细胞。②倒置显微镜下，破牙细胞形态多样，通过伪足伸缩变化进行细胞迁移；HE染色破牙细胞胞核大而明显，胞核单个到数十个，核仁明显，胞浆周围伪足样突起：TRAP染色破牙细胞胞浆呈酒红色，胞核阴性不着色；扫描电镜观察到破牙细胞在牙片上形成吸收陷窝。③免疫细胞化学显示NR1、NR2B及GluR1在破牙细胞胞浆部位出现棕黄色颗粒沉淀，以靠近胞核处着色明显，胞核不表达。④MK801引起胞外Ca2+内流减少，但不能完全阻断Ca2+的内流。⑤细胞培养6h，破牙细胞骨架结构清晰，多数破牙细胞形成肌动蛋白环，MK801能减少破牙细胞肌动蛋白环的形成。 结论：①采用机械加酶消化法对3颗以上滞留乳牙分离培养，可获得较多人乳牙破牙细胞。②破牙细胞形态不固定，胞核数目不一，TRAP染色阳性并有吸收功能。③NR1、NR2B及GluR1在破牙细胞胞浆存在表达。④MK801通过抑制破牙细胞NMDA受体通路，引起细胞内Ca2+的浓度下降。⑤MK801能减少破牙细胞肌动蛋白环的形成，抑制破牙细胞硬组织吸收活性。