论文部分内容阅读
目的:探讨移植骨髓来源间充质干细胞治疗经小剂量链脲佐菌素(STZ)加高脂喂养诱导的2型糖尿病高血糖、肾脏病变及胰岛素抵抗的可能性。方法:1大鼠MSCs的分离培养和鉴定1.1无菌条件下取大鼠股骨和胫骨骨髓细胞做原代培养。1.2流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞CD34、CD44、CD45、CD71、CD105的表达情况。1.3 Vonkassa和油红O染色分别检测骨髓间充质干细胞成骨、成脂的诱导。2 2型糖尿病大鼠模型的建立2.1高脂喂养2月后一次性腹腔注射STZ建立大鼠2型糖尿病模型。2.2监测大鼠血糖、胰岛素、尿蛋白以确定建模是否成功。2.3用免疫荧光方法(Insulin抗体)检测胰腺冰冻切片。3尾静脉注射移植经过BrdU标记的MSCs3.1用BrdU标记MSCs。3.2尾静脉注射移植MSCs。4移植后疗效的检测4.1监测血糖、总胆固醇、甘油三酯、胰岛素、脂联素及尿白蛋白的变化。4.2取胰腺、肾脏切片,分别做H-E染色、PAS染色。4.3胰腺免疫荧光方法检测移植MSCs能在胰腺存在。4.4肾脏切片免疫荧光方法检测是否有外源MSCs存在。结果:1骨髓间充质干细胞培养、鉴定及体外标记:三代骨髓间充质干细胞呈梭形、漩涡状生长。流式细胞仪表面标志鉴定CD34、CD45呈阴性,CD44、CD71、CD105呈阳性,符合骨髓间充质干细胞的生长特性,并成功的用BrdU对其进行了标记。2骨髓间充质干细胞经成骨、成脂诱导后可表达骨细胞、脂肪细胞特征。3建立了大鼠糖尿病肾病模型,其血糖值稳定不低于16.7mmol/L,尿白蛋白大于1.9mg/24h。4免疫荧光检测移植后大鼠体内胰岛素及BrdU标记细胞:STZ胰岛破坏明显,植入骨髓间充质干细胞后胰岛增加;STZ组血清胰岛素维持较高水平,治疗后胰岛素水平有所下降(206.08±3.18pmol/l;193.68±3.06pmol/l),血清脂联素升高(2.02±0.24μg/l;3.57±0.72μg/l),血糖降低(22.51±1.87mmol/l;17.02±1.27 mmol/l),尿白蛋白分泌减少(1.95±0.21mg/24h;1.30±0.15/24h),肾小球平均截面积减少(7.55±0.18μm2×103;5.21±0.45μm2×103),肾小球平均体积缩小(8.12±0.029μm3×105;7.01±0.11μm3×105)。胰腺、肾脏组织中均可见BrdU标记的阳性细胞。(括号中分别为模型组;治疗组)结论:经尾静脉注射的骨髓间充质干细胞可定位于2型糖尿病大鼠胰腺及肾脏,并对受损胰腺及肾脏有修复作用,降低血糖,减少尿白蛋白排泄,降低血清胰岛素水平,提高血清脂联素含量,改善胰岛素抵抗。