特应性皮炎（Atopic Dermatitis,AD）,又称异位性皮炎,异位性湿疹或遗传过敏性皮炎,属于慢性、复发性、瘙痒性皮肤疾病。特应性皮炎各年龄段均可发病,儿童最常见,其特征为皮肤干燥、瘙痒剧烈、常有“异位性”家族史,由于其发病原因多种多样,其发病机制至今尚未阐明。近年特应性皮炎的发病率有明显增高的趋势,长期的慢性瘙痒常引起患者失眠,还伴随有一系列皮肤特征性改变,包括干皮症、耳根裂纹、鱼鳞病、掌纹症、毛周角化症、皮肤感染倾向（特别是金黄色葡萄球菌和单纯疱疹病毒感染）、非特异性手足皮炎、湿疹、唇炎、复发性结膜炎等多种症状,从而影响患者和家人的生活质量,甚至影响患者的自信。温度敏感Ca²⁺通透的瞬时受体电位香草酸3型受体（Transient receptor potential vanilloid 3,TRPV3）通道作为瞬时受体电位（TRP）通道TRPV亚家族的一员,在皮肤中表达丰富。人类的奥姆斯特综合征（Olmsted syndrome,OS）患者,DS-Nh小鼠以及WBN/Kob-Ht大鼠中均发现TRPV3的功能增强点突变造成与特应性皮炎相似的症状,如强烈的瘙痒,过度的角质化,严重的炎性细胞浸润,高度表达的免疫球蛋白E等。这些结果表明,过度激活的TRPV3参与了皮肤炎症疾病的发病过程,特异性抑制TRPV3通道功能有望成为有效预防和治疗特应性皮炎或炎症性皮肤病的新手段。研究目的:利用实验室前期报道的天然的TRPV3抑制剂蛇床子素作为工具药,局部应用在接触致敏剂DNFB建立的AD及耳肿胀小鼠模型上,证明抑制TRPV3确实可以缓解炎症症状,建立AD等炎症疾病与TRPV3之间的联系;利用遗传学和药理学抑制TRPV3验证TRPV3的抑制可以预防香芹酚诱导的皮肤炎症的发生,为AD等炎症性皮肤疾病的预防和治疗提供一条新的路径。研究方法:本研究通过动物体内实验,利用DNFB诱导小鼠的AD模型,以选择性的TRPV3抑制剂蛇床子素进行治疗,评价TRPV3抑制剂是否可以缓解DNFB诱导的AD及耳肿胀症状。并且,使用TRPV3激动剂香芹酚分别应用于WT小鼠、TRPV3^-/-小鼠以及蛇床子素局部抑制TRPV3的小鼠观察能否诱发AD样症状或耳肿胀,评价TRPV3在炎症发展中的作用。并且,通过将DNFB和蛇床子素应用在分离的小鼠原代角质形成细胞中,检测DNFB对小鼠原代角质形成细胞的影响。同时,采用免疫印迹试验（WB）、逆转录-聚合酶链反应（Q-PCR）、免疫组织化学（IHC）染色和苏木素-伊红（H&E）染色的皮肤组织学检测TRPV3、炎症因子TNF-α和IL-6的表达,实验过程中记录耳朵厚度、耳朵肿胀评分以及皮炎评分。研究结果:在DNFB诱导的小鼠AD模型中,背部皮肤石蜡切片显示皮肤明显增厚并且伴有严重的细胞浸润,同时WB结果表明TRPV3以及炎症因子TNF-α和IL-6的表达水平显著升高,通过应用TRPV3抑制剂蛇床子素可以降低皮肤厚度,减轻炎性细胞浸润程度,同时WB结果显示下调TRPV3以及炎症因子TNF-α和IL-6的表达,这表明抑制TRPV3通道能够缓解DNFB诱导的AD症状。在DNFB诱导的小鼠耳肿胀模型中,耳朵冰冻切片结果显示耳朵厚度明显增加,同时WB结果显示TRPV3表达水平明显上调,通过使用TRPV3抑制剂蛇床子素能够减少耳朵厚度,缓解耳肿胀的程度,表明抑制TRPV3通道能够缓解小鼠耳朵炎症的状况。在TRPV3激动剂香芹酚诱导小鼠皮肤AD样症状实验中,使用TRPV3激动剂香芹酚能够诱导野生型小鼠出现AD样症状,但在TRPV3^-/-小鼠及蛇床子素局部抑制TRPV3的野生型小鼠中则无法诱导相同的AD样症状,表明TRPV3的抑制能够预防小鼠AD样症状的发生。在TRPV3激动剂香芹酚诱导小鼠耳肿胀实验中,重复应用香芹酚引起野生型小鼠耳肿胀的程度比TRPV3^-/-小鼠更为严重,进一步表明TRPV3在炎症疾病的发展过程中具有重要作用。在小鼠角质形成细胞实验中,使用DNFB能够增加TRPV3及炎症因子的表达,而应用蛇床子素则能够减少TRPV3及炎症因子的表达。研究结论:1.局部应用DNFB能够诱导TRPV3上调的AD小鼠模型。2.使用蛇床子素选择性抑制TRPV3能够逆转DNFB诱导的AD症状。3.局部应用DNFB能够造成TRPV3上调的小鼠耳肿胀模型。4.外用TRPV3抑制剂蛇床子素对DNFB所致的耳肿胀具有抑制作用。5.局部抑制TRPV3和TRPV3基因敲除能够缓解TRPV3激动剂香芹酚诱导的AD样症状或耳肿胀程度。6.蛇床子素能够抑制DNFB诱导的小鼠原代角质形成细胞中TRPV3及炎症因子的表达。7.皮肤局部特异性抑制TRPV3功能可能成为潜在预防和治疗特应性皮炎或炎症性皮肤病的新策略和手段。