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背景:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)属于慢性进展性的自身免疫病,主要特征是滑膜增生、软骨及骨组织破坏,具体发病机制仍不十分清楚。目前认为可能与细胞因子网络调节紊乱、滑膜过度增生、侵润及T细胞亚群分化失衡有关。白细胞介素34(Interleukin 34,IL-34)是2008年发现的一种具有维系巨噬细胞及树突状细胞生存、发育及活化功能的细胞因子,主要通过与集落刺激因子-1受体(colony stimulation factor-1 receptor,CSF-1R)结合而发挥作用。类风湿关节炎患者血清和关节滑液中IL-34的含量均高于正常人,并且与RF及抗CCP抗体呈正相关。滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)是类风湿关节炎发病中的重要角色,其表面表达高水平CSF-1R,提示IL-34可能通过与其表面受体结合而调控FLS的功能,从而参与了疾病的发病过程。目的:本研究旨在探索IL-34在类风湿关节炎患者发病和进展中所起的作用,并深入研究IL-34通过调控FLS细胞参与RA发病过程的具体机制。方法:收集RA患者外周血并分离出血清,酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测RA患者及健康对照血清IL-34水平;评估IL-34水平与临床各个指标的关系。分离培养RA患者FLS,培养至4~6代利用流式细胞术鉴定FLS在培养中的纯度,并检测FLS表面IL-34受体(CSF-1R)表达水平;在分离培养的FLS中加入重组IL-34刺激,蛋白芯片技术检测细胞上清液中不同细胞因子的分泌;增加FLS细胞株数,反转录PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)及ELISA法验证蛋白芯片结果,检测IL-34刺激前后及加入IL-34受体拮抗剂后细胞中il-6,cox-2的mrna表达水平及细胞培养上清的il-6,pge2的分泌;提取fls总rna,rt-pcr检测caspase8mrna表达水平,观察il-34对fls凋亡的影响,mtt法检测il-34刺激后的细胞增殖;提取fls总蛋白,westernblot检测fls胞内erk-1/2、jnk-1/2/3、p38、nf-κb通路的活化,并用相应的信号通路抑制剂处理fls,加入il-34刺激后rt-pcr检测细胞中il-6,cox-2的mrna表达水平,elisa法检测细胞培养上清的il-6,pge2的分泌;体外分离健康人pbmc,磁珠分选法分离出cd4+t细胞,流式细胞术检测分离后cd4+t细胞百分率,需95%以上方可用于实验中;将分离纯化好的cd4+t细胞,与ra患者fls以直接接触或transwell体系共培养,体系中加入cd3/cd28或cd3/cd28及il-34,流式细胞术检测th17百分率;elisa法检测共培养上清il-6水平;向ra患者fls与健康人外周血分离出的cd4+t细胞共培养体系中加入il-6受体拮抗剂,流式细胞术检测th17百分率。结果:ra患者血清中il-34水平较健康对照相比显著升高;ra患者血清il-34的含量与esr、crp、rf、抗ccp抗体水平均呈正相关;ra患者fls表面高表达il-34受体(csf-1r),重组il-34可显著促进ra患者fls细胞分泌多种细胞因子,尤其是il-6、pge2、ena-78、il-8、gro及mcp-1;重组il-34还可以促进fls的增殖,抑制其凋亡;csf-1r拮抗剂可抑制fls细胞分泌il-6、pge2等因子;westernblot结果显示il-34刺激后的fls胞内p-erk-1/2、p-p38、p-jnk-1/2/3及p-nf-κb显著增多,总erk-1/2、p38、jnk-1/2/3及nf-κb不变;使用p38、jnk-1/2/3及nf-κb抑制剂处理fls后,il-34促进il-6生成被明显抑制,p38及nf-κb抑制剂可明显降低pge2的表达;从健康人外周血中分离获得的pbmc中,csf-1r仅在单核细胞表面可检测到,t淋巴细胞及b淋巴细胞活化及非活化状态下均不表达csf-1r;ra患者fls与健康人cd4+t细胞共培养体系中,加入抗cd3/cd28抗体或抗cd3/cd28抗体/il-34刺激后的共培养体系中th17的产生在直接接触与transwell体系下无明显差异;加入抗cd3/cd28抗体/il-34可显著促进共培养体系中th17的数量增加及共培养体系中il-6的分泌,且il-6水平较单独il-34刺激fls分泌的il-6水平显著升高;il-6受体拮抗剂可显著抑制共培养体系中th17数量增加。结论:血清中il-34水平与ra发病和进展密切相关;il-34在体外可调控fls增殖及抑制其凋亡,并可促进多种细胞因子及可溶性蛋白的分泌;并且促进IL-6的产生是通过JNK/P38/NF-κB信号通路,PGE2的产生与P38/NF-κB信号通路相关;IL-34可通过促进RA患者FLS分泌IL-6来调控Th17细胞而参与RA发病。