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目的：革兰氏阴性菌（Gram-negative bacteria，GNB）是引起人和实验动物感染的主要因素，脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）为GNB所共有，是激发机体免疫的主要物质，大量的研究表明它是引起脓毒症的重要原因。近年来的研究发现脂多糖结合蛋白（lipopolysaccharide binding protein,LBP）、脂多糖受体CD14以及Toll样受体4（Toll-Like Receptor 4，TLR4）对机体识别LPS起着关键作用，目前认为LPS受体是由TLR4、MD-2组成的复合受体（coreceptor） TLR4/MD-2,能将LPS信号传递入细胞内，激活核转录因子NF-κB、AP-1，从而引起炎症因子的大量释放,这是发生全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome , SIRS)、脓毒症(sepsis)甚至多器官功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome , MODS)的基础。到目前为止，人体创伤后LPS复合受体TLR4/MD-2基因在外周单核细胞内的表达及TLR4在单核细胞膜上的表达还未见文献报道，为此，本研究观察不同程度的创伤患者外周血单核细胞TLR4、MD-2的表达变化, 同时对血清TLR4的含量以及内毒素进行检测，并结合患者预后进行分析，为进一步明确LPS的作用机制、提高创伤诊疗水平提供实验依据。 材料和方法：既往健康，ISS评分（AIS-90标准）≥9分（9-32分，平均22.8±4.3分）的创伤患者35例，男性23例，女性12例，年龄37.6±16.8岁，于创伤后第1d、3d、5d分别采集外周静脉血10ml，肝素（25U/ml）抗凝；8例健康志愿者作对照，男性5例，女性3例，年龄29.8±3.8岁。35例患者中，17例痊愈，<WP=9>10例因脊髓损伤而发生不同程度的瘫痪，8例死于呼吸循环衰竭，按其预后情况分别将患者分为痊愈组、瘫痪组和死亡组。Ficoll法分离单核细胞，Tripure法提取细胞总mRNA，RT-PCR法扩增TLR4、MD-2，以β肌动蛋白（β-actin）基因作为内参照，将PCR产物于1.5%琼脂糖中电泳，并在电脑凝胶成像系统中分析电泳带的灰度值，以TLR4、MD-2的灰度值表示TLR4、MD-2 mRNA表达的相对水平； ELISA法检测细胞膜及血清中TLR4、CD14的表达；采用鲎试剂法测血清LPS浓度；ELISA法检测血清中细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10的含量。结果以均数±标准差表示()。结果：创伤后第1d，血清LPS水平升高，第3d达到高峰，第5d有所下降但仍高于伤后第1d的水平，其中瘫痪组、死亡组明显高于痊愈组；创伤后血清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10水平升高，瘫痪组、死亡组明显高于痊愈组；创伤后第1d TLR4、MD-2基因、胞膜TLR4、胞膜CD14的表达明显降低，痊愈组的表达在伤后第5d恢复至正常水平，而预后不良的瘫痪组、死亡组第5d仍处于低水平；创伤后第1d血清CD14的表达均升高，痊愈组于第5d基本恢复正常，瘫痪组、死亡组明显高于痊愈组，第5d仍处于高水平；本实验观察, 创伤患者的血清中存在有一定量的TLR4蛋白，它的表达变化不同于胞膜TLR4，而与血清CD14的表达相似，创伤后第1d血清TLR4蛋白升高，痊愈组于第5d基本恢复正常，瘫痪组、死亡组明显高于痊愈组，第5d仍处于高水平。结论：创伤可引起内毒素血症；创伤后人外周血单核细胞内TLR4、MD-2基因、胞膜TLR4、CD14的表达在伤后1d即降低，第5d恢复正常的患者预后良好，而预后差的患者仍处于低水平；创伤后血清CD14的表达升高，第5d恢复正常的患者预后良好，而预后差的患者第5d仍处于高水平；本实验还观察发现创伤患者<WP=10>的血清中有一定量的TLR4蛋白存在，它的表达变化趋势与血清CD14相似，在一定程度上反映了机体的免疫机能并与患者的预后有关。与体外实验所得结果不同，创伤患者外周血单核细胞TLR4、MD-2 mRNA的表达水平下降，TLR4蛋白表达量减少，提示，在创伤内毒素血症情况下，机体负反馈调节作用可能导致了单核细胞表达TLR4、MD-2的机能呈降低的状态。此外，根据本实验的结果，我们推测除膜结合型的TLR4外，可能还存在可溶性TLR4（soluble TLR4），其功能与结构尚需作进一步研究。 总之，对创伤患者外周血单核细胞TLR4、MD-2、CD14的观察，有助于判断患者的免疫机能、提高临床诊疗水平。