基于氨基酸氧化酶的α-氨基酸的手性拆分

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α-氨基酸对于生命过程研究和生物医药开发有重要意义。α-氨基酸是蛋白质的主要组分,是生物体中最重要的氨基酸,而所有人体内组成蛋白质的氨基酸则都是α-氨基酸。自然界存在的20种氨基酸中,除甘氨酸外,α-氨基酸都是手性的,它们各自发挥着其独特的功能,与人们的生存、生命息息相关。然而,天然氨基酸数目有限,非天然氨基酸则多为外消旋体,且D-型和L-型对映体的生理作用迥异。本文通过生物催化的方法对外消旋的α-氨基酸进行手性拆分。生物催化中常用的有机体主要是微生物,其本质是利用微生物细胞内的酶进行催化,促进生物转化的进程。酶催化的反应对底物具有高度立体专一的特性,这种性质可用于使外消旋体中的某一异构体参加酶促反应,被消耗为另一物质,而另一异构体不受影响,但性质与消耗后形成的物质明显不同,使利用一般物理分离方法将两个对映体的拆分变为可能。本文实验过程主要分为三个方面:1.通过对微生物的筛选确定各类微生物对α-氨基酸的手性选择:选取DL-Met为反应底物,通过对多种微生物菌株的筛选,进行D-Met和L-Met的拆分,从中筛选出具有高选择性和高效率的菌株。2.选取纤细酵母菌(Rhodotorula graminis, R. g.)作为反应菌株,并对R.g.提供的LAAO进行底物特异性和反应机理等进行研究。3.选取气单胞(Aeromonas sp.)和破壁后的HP0203菌(hpDAAO)作为反应菌株,提供D-氨基酸氧化酶(DAAO),分别对其底物的特异性,反应机理等进行研究。
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