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[目的]旨在阐明CRC(colorectal cancer)细胞借助miRNA及相关靶基因途径影响结直肠癌侵袭和转移进程的分子机制,为CRC肝转移的临床诊断、治疗和预后评估提供新的生物学标志物和分子治疗靶点。[方法]第一部分:1、microRNA芯片检测肝转移CRC相关表达缺失的miRNA。2、实时荧光定量PCR检测miR-143-3p在肝转移及原位CRC组织中的表达以进一步验证芯片结果。3、MTT实验检测过表达miR-143-3p的结直肠癌Lovo细胞增殖能力的变化。4、Transwell实验检测过表达miR-143-3p的Lovo细胞侵袭和迁移能力的改变。第二部分:1、运用生物信息学技术和网络资源预测miR-143-3p的候选靶基因,并通过Western Blot法检测转染miR-143-3p模拟物的Lovo细胞中各候选靶基因蛋白水平的表达。2、Real-timePCR检测转染不同浓度梯度的miR-143-3p模拟物后Lovo细胞中候选靶基因ITGA6和ASAP3的表达情况。3、运用RNA干扰技术使靶基因在Lovo细胞中呈现低表达状态,并通过Real-time PCR、Western Blot法分别检测siRNA对Lovo细胞中靶基因(ITGA6和ASAP3)mRNA和蛋白表达水平的抑制效率。4、应用Transwell和划痕实验检测分别低表达ITGA6、ASAP3对Lovo细胞侵袭和迁移能力的影响。5、应用MTT实验检测分别低表达ITGA6、ASAP3对Lovo细胞增殖能力的影响。第三部分:1、运用组织芯片+免疫组化技术检测ITGA6和ASAP3在CRC组织和正常结直肠组织中的表达差异。2、分别分析两个指标的表达强度与患者的临床病理特征的相关性。[结果]第一部分:1、miRNA表达谱结果显示,与正常结直肠相比,miR-143-3p在肝转移CRC中的表达显著下降(59倍),而在原位CRC中的表达无明显差异。2、Real-time PCR结果显示miR-143-3p在原位CRC组织中下降5倍以上的比例为25%(3/12),而在肝转移CRC组织中下降5倍以上的比例为50%(4/8)。3、过表达miR-143-3p对Lovo细胞的增殖能力无影响。4、过表达miR-143-3p能够抑制Lovo细胞的侵袭和迁移能力。第二部分:1、生物信息学技术和网络资源预测出4个miR-143-3p的候选靶基因:ASAP3、MSI2、CRELD 和 ITGA6;在 Lovo 细胞中只有 ITGA6 和 ASAP3 的蛋白表达水平与过表达的miR-143-3p呈负相关。2、ITGA6和ASAP3 mRNA表达水平均随着Lovo细胞中miR-143-3p mimic转染浓度的升高而逐渐下降。3、ITGA6和ASAP3的siRNA能显著抑制Lovo细胞中ITGA6和ASAP3的表达。4、降低ITGA6和ASAP3的表达能够抑制Lovo细胞的侵袭和迁移能力。5、降低ITGA6和ASAP3的表达对Lovo细胞的增殖能力无影响。第三部分:1、ITGA6在CRC组织中总阳性率为36.00%;而在正常结直肠组织中总阳性率为20.00%;2、ASAP3在CRC组织中总阳性率为39.50%;而在正常结直肠组织总阳性率为16.00%,ITGA6和ASAP3在肿瘤与正常组织之间的表达差异均具有统计学意义。3、高表达的ITGA6与患者的TNM分期密切相关(P<0.05),高表达的ASAP3与患者TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。[结论]1、miR-143-3p在肝转移CRC中表达水平显著下降,其可能参与了 CRC肝转移的形成机制。2、CRC中miR-143-3p的显著下降导致其靶基因ITGA6和ASAP3表达水平明显升高,使CRC细胞获得较强的侵袭和转移能力,从而促进CRC恶性演进。3、ITGA6和ASAP3在CRC组织中的表达高于正常组织,其表达强度与重要的临床病理特征有明显的相关性。