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目的:长期应用阿片类物质必将导致躯体依赖和精神依赖的形成。大量摄入外源性阿片样化合物(EOC)如吗啡、海洛因等,可抑制内源性阿片肽(EOP)的形成和释放,一旦撤药,体内EOP和EOC都会缺乏,导致以戒断症状为主要表现的生理机能严重紊乱,同时伴随强烈的心理渴求。躯体依赖和精神依赖是导致阿片类物质滥用的主要原因,对其机制的研究一直是热点问题。迄今为止,阿片成瘾的确切机制还不十分清楚。多年的研究发现内源性阿片肽的变化不足以解释阿片耐受、依赖和戒断的形成,遂即人们将研究的重点集中到了阿片受体后效应。其中,与受体偶联的胞内钙(calcium, Ca2+)、钙调素(calmodulin, CaM)、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ, CaMKⅡ)的改变在吗啡依赖和戒断反应过程中具有重要作用。胆囊收缩素(cholecystokinin, CCK)最早发现于肠道并作为胃肠肽激素调节胆囊收缩和胰腺的分泌功能,后来研究发现CCK广泛存在于中枢和周围神经系统,作为神经递质或调质发挥重要作用。CCK在体内存在多种活性形式,其中八肽胆囊收缩素(Cholecystokinin Octapeptide, CCK-8)是存在于小肠、血液和中枢神经系统最重要的活性形式,通过与受体结合而发挥作用。CCK受体有两种形式,CCK1主要分布于外周组织,而CCK2主要分布在中枢神经系统。研究表明,中枢CCK-8作为一种抗阿片物质,能对抗阿片引起的摄食增加,拮抗吗啡镇痛和阿片肽镇痛。CCK受体拮抗剂不但能针对戒断症状进行对症治疗,而且有一定程度的防止复吸的作用,但具体机制还未完全阐明。皮质、尾壳核、海马等脑区与吗啡成瘾密切相关,因此本实验采用剂量递增法建立吗啡依赖大鼠模型,以纳洛酮催促戒断建立吗啡戒断模型,从Ca2+-CaM-CaMKⅡ信号通路入手研究CCK-8及其受体拮抗剂抑制吗啡戒断反应的分子机制。方法:健康雄性Wistar大鼠66只,体重190g-210g,随机分为11组:盐水对照组(N.S组)、依赖组(Mor组)、戒断组(Mor+Nal组)、CCK-8慢性干预组(CCK-8+Mor+Nal组)、CCK1R拮抗剂L-364,718慢性干预组(L-364,718+Mor+Nal组)、CCK2R拮抗剂LY-288,513慢性干预组(LY-288,513+ Mor+ Nal组)、溶剂对照慢性干预组(Vehicle+Mor+Nal组)、CCK-8急性干预组(Mor+CCK-8+Nal组)、CCK1R拮抗剂L-364,718急性干预组(Mor+L-364,718+ Nal组)、CCK2R拮抗剂LY-288,513急性干预组(Mor +LY-288,513 + Nal组)、溶剂对照急性干预组(Mor+Vehicle+Nal组)。应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡(10-50mg·kg-1,每日2次,连续5天)建立吗啡依赖模型,第6天8时给予吗啡一次50mg·kg-1,2小时后注射纳洛酮5mg·kg-1建立催促戒断模型,以腹腔注射CCK-8及受体拮抗剂进行干预。模型建立后取大鼠皮质、海马和尾壳核,采用流式细胞术测定神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和钙调蛋白活性(CaM activity);Western-blot方法检测大鼠皮质、海马和尾壳核内CaMKⅡ蛋白表达的变化。结果:1 CCK-8及受体拮抗剂对吗啡戒断症状的影响纳洛酮催促戒断后大鼠体重下降,较吗啡依赖组明显下降(P<0.05),并出现湿狗样抖动、齿颤、流泪、流涎等症状,说明催促戒断模型建立成功。CCK-8及CCK1R拮抗剂L-364,718和CCK2R拮抗剂LY-288,513均可抑制戒断大鼠体重减轻和其他戒断症状的发生。2 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区[Ca2+]i的影响吗啡依赖组大鼠皮质、尾壳核和海马内[Ca2+]i显著高于对照组(P<0.01),戒断后[Ca2+]i均有显著性降低(P<0.01)。慢性CCK-8、L-364,718和LY-288,513干预可使纳洛酮催促戒断后尾壳核、海马的[Ca2+]i明显升高(P<0.01或P<0.05),而皮质与戒断组相比无显著差异(P>0.05)。急性L-364,718、LY-288,513干预使戒断后海马、尾壳核[Ca2+]i明显升高(P<0.01或P<0.05),皮质则无明显变化(P>0.05);溶剂和急性CCK-8干预作用不明显,皮质、海马、尾壳核[Ca2+]i与戒断组相比均无显著差异。3 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区CaM活性的影响吗啡依赖组大鼠皮质、海马、尾壳核内CaM活性明显高于对照组(P<0.01),戒断后CaM活性显著降低(P<0.01)。慢性CCK-8、L-364,718、LY-288,513干预使纳洛酮催促戒断后皮质、海马、尾壳核内CaM活性明显升高(P<0.01或P<0.05);急性L-364,718、LY-288,513处理,使戒断大鼠海马、尾壳核内CaM活性明显升高(P<0.05),皮质无明显变化(P>0.05);溶剂和急性CCK-8干预作用不明显,皮质、海马、尾壳核内CaM活性与戒断组相比均无显著性差异(P>0.05)。4 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠不同脑区CaMKⅡ蛋白表达的影响吗啡依赖组大鼠皮质、海马、尾壳核内CaMKⅡ蛋白表达较对照组明显升高(P<0.01),戒断后CaMKⅡ蛋白表达显著下降(P<0.01)。慢性CCK-8、L-364,718、LY-288,513干预使纳洛酮催促戒断后皮质、海马、尾壳核内CaMKⅡ蛋白表达较戒断组显著升高(P<0.01);急性L-364,718、LY-288,513处理,使戒断大鼠海马内CaMKⅡ蛋白表达较戒断组显著性升高(P<0.01),皮质、尾壳核无明显变化;溶剂和急性CCK-8干预作用不明显,皮质、海马、尾壳核内CaMKⅡ蛋白表达较戒断组无显著性差异(P>0.05)。结论:CCK-8及其受体拮抗剂干预能够抑制吗啡依赖大鼠催促戒断反应,该作用可能是通过调节皮质、海马、尾壳核内Ca2+-CaM-CaMKⅡ信号转导途径来实现。该作用具有明显的脑区特异性。