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研究背景:肺癌是全球范围内与肿瘤死亡相关的最严重的疾病之一,已经严重影响到人类的生活和健康。放射治疗被认为是一种有效的治疗手段,在肿瘤的治疗中起着关键的作用。然而放疗敏感性的降低即放疗抵抗也逐渐成为放射治疗失败的瓶颈,如何提高放疗敏感性成为放射治疗的关键。c-Myc与肺癌的放疗抵抗密切相关,但c-Myc与Fas之间的调控关系及其在肺腺癌放疗抵抗中的作用却未见相关报道。研究目的:在肺腺癌A549细胞中研究研究Fas与c-Myc之间的调控关系及其对肺腺癌放疗敏感性的作用。材料与方法:一、肺腺癌细胞株A549及其放疗抵抗细胞株A549/R在细胞增殖与凋亡方面的研究。通过辐射诱导建立放疗抵抗细胞株A549/R,EdU染色分别检测经射线处理及对照组未经射线处理对A549/R细胞及A549细胞增殖的影响。进一步在A549/R细胞及A549细胞中检测射线处理组及对照组在细胞周期方面的差异。另外,通过AnnexinV-FITC/PI双染及MTT检测两种细胞株经射线处理组与对照组在细胞凋亡及细胞活力方面的差异。利用Western blot技术分别检测c-Myc及Fas在A549细胞及A549/R细胞中的表达。二、c-Myc与Fas之间的调控关系及其对肺腺癌细胞放疗抵抗的作用。(一)在A549/R细胞中抑制c-Myc表达,利用Western blot技术检测c-Myc和Fas在蛋白水平的表达变化,采用MTT技术检测细胞活力。在A549细胞中过表达c-Myc,利用Western blot技术检测c-Myc和Fas在蛋白水平的表达变化,采用MTT技术检测细胞活力。(二)在A549/R细胞中抑制c-Myc的表达并给与射线照射,采用MTT、AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞活力与凋亡,并且通过Western blot技术检测c-Myc、Fas、Bid、Bcl-2、Bax、pro-caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9 的表达。同样,在A549细胞中过表达c-Myc后给与射线照射,采用MTT、AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞活力与凋亡,并且通过Western blot技术检测c-Myc、Fas、Bid、Bcl-2、Bax、pro-caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9 的表达。结果:1.EdU染色结果显示,经过射线处理的A549/R细胞及A549细胞分别与对照组相比,DNA复制明显减少,两者未见明显差异。细胞周期检测结果显示,两者经射线处理后分别与对照组相比都有G2-M期阻滞。细胞凋亡检测结果显示,辐射抵抗细胞株A549/R经射线处理组与对照组未见明显差异,而A549细胞经射线处理组与对照组相比凋亡明显增多。MTT检测结果与细胞凋亡检测结果相一致。Westernblot检测结果显示,c-Myc在A549/R细胞中的表达明显高于A549细胞,提示在A549/R细胞中c-Myc表达升高可能与放疗抵抗有关。Fas在A549/R细胞中的表达明显低于A549细胞,进一步提示Fas的低表达可能与A549/R细胞的放疗抵抗相关。2.A549/R细胞抑制c-Myc的表达,Fas的表达升高,并且细胞活力降低。在A549细胞中过表达c-Myc,Fas在蛋白水平表达降低。同样,采用MTT检测细胞活力,c-Myc过表达使细胞活力增加。抑制c-Myc表达后照射组与非照射组相比细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显增高。抑制c-Myc的表达后照射组与非照射组相比较 Fas、Bax 的表达水平明显升高,Bid、Bcl-2、pro-caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9的表达明显降低。过表达c-Myc后照射组与非照射组比较细胞活力明显升高,细胞凋亡率明显降低。过表达c-Myc后照射组与非照射组相比较Fas、Bax的表达水平明显降低,Bid、Bcl-2、pro-caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9 的表达明显升高。结论:1.c-Myc及Fas在A549细胞及A549/R细胞中表达呈负相关,且A549/R细胞的放疗抵抗与细胞抗凋亡相关性较大,而与细胞增殖相关性较小。2.c-Myc下调能够使Fas表达上调,增强辐射诱导的放疗敏感性;反之,则降低辐射诱导的放疗敏感性。3.c-Myc表达降低使外源性Fas信号凋亡途径与内源性线粒体凋亡途径共同作用,增加细胞凋亡。