榛子外生菌根菌的分离、鉴定及其对幼苗生长的影响

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榛子作为坚果之王,具有重要的经济价值,发展榛子产业对东北山区经济发展起着重要的作用。真菌可与植物根系共生,形成互惠互利的器官菌根,利于植物生长。本团队在东北人工杂交榛园中鉴定出一种菌根真菌。本实验对两个榛园的土壤进行微生物多样性分析,一处为菌根丰富的榛园(MRO),另一处为菌根不丰富的榛园(MDO),鉴定出与菌根相关真菌。对菌根真菌进行分离、纯化,将纯化后得到的真菌进行分子鉴定。选取的榛子幼苗进行无菌萌发,进而获取大量榛子无菌幼苗,通过对榛子幼苗接种菌根真菌,研究菌根真菌对榛子幼苗的生长发育、植株根系以及光合响应的影响。分析结果表明:1.在MRO与MDO中,对榛子根际土壤进行微生物多样性分析,MRO根际测定的序列中,显示担子菌门(Basidiomycetes)是优势菌门,其中硬皮属(Scleroderma)占约97.07%,而MDO中占到0.13%,前者硬皮属占比高于后者。因此推测硬皮属真菌在榛园中形成菌根。2.从纯菌根培养物中提取出基因组DNA,对ITS1-ITS4区域进行PRC扩增,然后,与真菌ITS1-ITS4序列在线比对,发现菌根培养物中的真菌序列与大孢硬皮马勃菌(Scleroderma bovista)具有99.82%的相似性,因此我们将该菌株鉴定为大孢硬皮马勃菌。为了进一步观察菌根结构,对菌根进行石蜡包埋、切片和染色处理。石蜡切片观察到外延菌丝、菌套和哈蒂氏网结构,这一结果证明了幼苗根系与菌根真菌之间共生并形成外生菌根。3.对接种菌根真菌(Sb)与未接种菌根真菌(CK)的榛苗进行比较,Sb组榛苗株高为42.50cm、茎粗为7.16mm、叶绿素SPAD值为5.00、叶面积为8786.84cm~2、地上部分鲜重为22.68g、地下部分鲜重为21.07g、总株重为43.93g。CK组榛苗的株高为16.64cm、茎粗为3.88mm、叶绿素SPAD值为1.46、叶面积为2743.2cm~2、地上部分鲜重为5.89g、地下部分鲜重为8.31g、总株重为13.71g。Sb组榛苗株高、茎粗、叶绿素含量、叶面积、地上部分鲜重、地下部分和总株重显著增加(P<0.05)。株高、茎粗、叶绿素含量、叶面积、地上部分鲜重、地下部分和总株重分别增加2.02、1.54、2.14、3.80、2.70、2.25、2.54和2.56倍。真菌也促进了根部发育,Sb组榛苗根长为3436.18cm、投影面积240.68cm~2、表面积756.12cm~2、体积13.47cm~3、平均直径0.71mm以及根尖数1314个和交叉数7086个。而CK组榛苗根系长度为1345.00cm、投影面积为120.55cm~2、表面积为387.27cm~2、体积为7.11cm~3、平均直径为0.66mm和根尖数为10561.07个、分叉数为12586.00个和交叉数为3522.50个。同样真菌对榛子的光合响应也起到促进的作用,如CO2饱和点提高到1347.5μmol·mol-1,扩大了榛子对于CO2的利用范围,提高CO2利用率;光饱和点提高到18.97μmol·m-2·s-1,扩大了榛子对于光有效辐射的利用范围,提高光有效辐射利用率。因此,实验结果显示,接种大孢硬皮马勃菌(Scleroderma bovista)菌株极大地促进了榛树的生长,在东北榛树育苗和栽培方面具有潜在的应用前景。
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