中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）在调节免疫血栓的形成过程中扮演着重要角色。感染条件下,关于血管内NETs的形成,目前研究多数聚焦于活化的血小板介导中性粒细胞形成NETs的机制研究,然而内皮细胞介导NETs形成的研究相对较少。在感染条件下,血管内皮细胞显著表达ICAM-1分子,中性粒细胞与血管内皮细胞ICAM-1直接相互作用能否可以引起NETs的产生,此过程中介导NETs形成的机制如何,目前尚未明晰。我们利用脂多糖（LPS）或佛波酯（PMA）对稳定黏附于内皮细胞表面分子ICAM-1上的中性粒细胞进行刺激4小时,再利用Sytox green染料标记NETs-DNA,并标记NETs形成的特异性生物标记物Cit H3,通过荧光显微镜观察NETs形成以及Cit H3产生,Image J以量化NETs的形成情况。结果表明PMA和LPS均能诱导稳定黏附于ICAM-1上的中性粒细胞产生NETs。PMA诱导产生的NETs不依赖于β2整合素LFA-1或Mac-1。相反,LPS刺激产生NETs依赖于β2整合素中Mac-1,而不依赖LFA-1。抑制肌动蛋白丝或Talin-1后,无论是LPS刺激还是PMA刺激,NETs的形成均显著下降。研究胞内信号通路,敲除相关蛋白基因是直接而有效的方法。但是,由于中性粒细胞是终末分化细胞,且寿命短,无法对其进行基因操作以研究信号通路。HL-60细胞是人原髓细胞白血病细胞,常被用于诱导分化成中性粒细胞样分化HL-60（Neutrophil-like differentiation of HL-60,d HL-60）细胞,以研究中性粒细胞的生物学功能。HL-60细胞作为模式细胞,可对其进行基因操作,是NETs形成信号通路研究的理想工具。但是目前,使用全反式维甲酸（ATRA）作为诱导剂分化的HL-60细胞形成NETs的最优条件尚不完全明确。因此,在本文中,设置梯度浓度的ATRA对HL-60细胞进行分化,并处理不同天数,以探索d HL-60细胞能够产生NETs的最优条件。通过吉姆萨染液对分化后HL-60细胞核形态进行染色以及流式检测HL-60细胞上LFA-1与Mac-1的表达,对HL-60的分化程度进行检测。结果表明,HL-60细胞的分化程度具有时间依赖性,分化7天后,80%以上的HL-60细胞成功分化成杆状细胞或成熟粒细胞;在1μM以及10μM ATRA诱导下,HL-60细胞上的Mac-1表达量显著上升。PMA刺激ATRA诱导分化的d HL-60细胞NETs形成的结果显示,ATRA分化5天后,1μM和10μM浓度下处理的HL-60细胞形成NETs的能力最强,显著高于相同分化天数,及其他ATRA浓度诱导的HL-60细胞的NETs形成。同时,也显著高于相同ATRA分化浓度,分化其他天数的HL-60细胞的NETs形成。因此我们推荐使用以浓度为1μM或10μM的ATRA诱导分化HL-60细胞至第5天,进行NETs相关实验。基于上述研究结果,本研究揭示了炎症条件下中性粒细胞与内皮细胞直接相互作用产生NETs的机制以及为研究者使用d HL-60细胞进行NETs研究提供一定的指导和参考,为相关疾病的治疗和新药物的开发提供了新的理论基础。