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研究背景心血管疾病严重影响人类健康,在全球统计的疾病负担中稳居第一。它不仅使人类身体健康受到损害、生活质量下降,还成为社会医疗及经济的一大负担。心血管疾病中最常见的,影响最为深远的就是动脉粥样硬化及相关疾病。其中心肌梗死及脑卒中最为凶险,易损斑块的破裂是主要原因。易损斑块是在动脉粥样硬化的基础上形成的,是一种隐匿的、缓慢发展的慢性病理过程,早期没有明显的临床症状及先兆表现,但它存在突然破裂和血栓形成的风险。如果能对易损斑块做到早期检测和干预治疗,会明显提高患者的生存质量并改善预后。目前检测易损斑块的办法主要有血清学检测和影像学检测。易损斑块主要特点是血管内皮损伤和炎症反应,局部病变明显。影像学能够较准确的捕捉病变部位,一定程度上了解斑块的形态、大小、成分。结合分子显像的分子影像学是目前热门的发展方向,它能揭示斑块分子水平的情况,尤其是MRI有着良好的软组织分辨率,能更清楚的反应斑块情况。炎症贯穿了斑块发生发展的整个过程,炎症活动性与斑块不稳定性密切相关。病理结果提示易损斑块内部大量巨噬细胞及炎症因子浸润,如IL-6、IL-8、TNF-α等。IL-6是反映炎症活动程度的重要炎症因子,如果能靶向检测斑块内IL-6的含量就可以了解斑块内的炎症活动情况,从而了解斑块的稳定性。本实验通过EDC/NHS的方法活化磁珠并与IL-6单克隆抗体结合,制备anti-IL-6-USPIO靶向分子探针,并通过ELISA试验检测探针体外活性,为进一步体内作为MR阴性对比剂检测易损斑块奠定基础。研究目的制备anti-IL-6-USPIO免疫磁珠,探讨其作为MR阴性对比剂的可行性,并检测其在体外靶向结合IL-6抗原的免疫活性及稳定性,进行初步体内验证。研究方法采用碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)的方法活化聚乙二醇(PEG)包被的四氧化三铁磁性纳米颗粒(USPIO)的表面羧基,活化的羧基再与IL-6单克隆抗体上的氨基进行反应形成共价键,从而构建anti-IL-6-USPIO靶向分子探针。采用透射电镜(TEM)、动态光散射法(DLS)、紫外分光光度计分析免疫磁珠的物理特征及磁珠表面偶联的抗体量。通过酶联免疫吸附间接法(ELISA试验)检测探针的免疫学特性。数据统计处理为独立t检验检测吸光度有无统计学差异。通过MRA进行初步动物实验。研究结果DLS显示偶联后的USPIO的平均水合粒径为82.98nm±23.96nm,较偶联前明显增大;紫外分光光度计结果显示IL-6单抗的偶联率为53.3%,其偶联量为533ug/mg;ELISA试验结果提示单纯USPIO组与anti-IL-6-USPIO组(浓度在40、200、1000ng/ml)、单纯 anti-IL-6 组(浓度在 1.6、8、40、200、1000ng/ml)相比存在统计学差异(P<0.05);anti-IL-6-USPIO组与单纯anti-IL-6组在1.6、8、40、200、1000ng/ml时也存在一定差异(P<0.05)。初步增强MRA显示anti-IL-6-USPIO能明显降低斑块T2WI信号强度。研究结论anti-IL-6-USPIO体外具有结合IL-6的免疫活性,为进一步的MR靶向阴性对比剂检测动脉粥样硬化斑块的研究奠定了实验基础。