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目的:本课题拟通过体外观察健脾清化方对丙型肝炎病毒(HCV)人肝癌细胞株HepG2细胞上清中载脂蛋白B(ApoB)、极低密度脂蛋白(VLDL)、甘油三酯(TG)的影响,科学客观的分析健脾清化方干预干扰素抗丙肝病毒的作用机制。为中医药治疗慢性丙型肝炎提供新的思路和视角。方法:(1)购买HepG2细胞株及SPF级SD雄性大鼠40只,采用随机分组的方法将SD大鼠分为四组即中药组、西药组、联合组及空白组,每组10只,前三组分别给予健脾清化方灌胃、干扰素皮下注射加利巴韦林灌胃、健脾清化方灌胃加干扰素皮下注射加利巴韦林灌胃,对照组给予同等体积的生理盐水灌胃,10天后取大鼠血清,制作出四组大鼠含药血清。(2)选取慢性丙型肝炎患者的血清,培养出丙肝病毒(HCV)感染的HepG2细胞。(3)四组大鼠含药血清分别干预丙肝病毒HCV感染的HepG2细胞。(4)于丙肝病毒(HCV)感染后和药物血清干预后48h、96h、144h、192h后分别收集细胞及上清,采用逆转录一聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测HepG2细胞中的丙肝病毒载量,用ELISA法检测HepG2细胞上清中ApoB、VLDL、TG含量的变化。通过各组检测的结果分析健脾清化方干预干扰素抗丙肝病毒的作用机制。结果:RT-PCR法检测细胞及上清中HCV-RNA正负链阳性,提示造模成功。结果显示:(1)对HepG2细胞上清中脂质的影响:造模前即空白组与造模后即对照组ApoB、VLDL、TG含量比较,三种脂质在两个不同组别间均有显著差异,且线图显示三种脂质与空白组相比均呈不同程度的下降趋势,提示对照组即丙肝病毒感染后HepG2细胞上清中ApoB、VLDL、TG含量较空白组减少。含药血清干预后测得ApoB、VLDL、TG含量在48h、96h、144h中的不同组别间无显著差异,P大于0.05;在192h中P小于0.05,四组间存在显著差异,且中药组、联合组与对照组相比P值均小于0.05,具有统计学意义,而西药组与对照组相比P大于0.05,无统计学意义;且线图显示四组随着时间的延长均呈不同程度的下降趋势,其中对照组下降最为明显,依次为中药组、西药组。提示联合组对ApoB、VLDL、TG含量的影响最为明显,其次是中药组,西药组无明显影响。(2)对丙肝病毒感染HepG2细胞中HCV-RNA滴度即丙肝病毒载量的影响:HCV-RNA滴度在144h、192h中四组间比较有显著差异,且144h中联合组与中药组、西药组对照组间存在显著差异;在192h中中药组与西药组、联合组之间,联合组与西药组、对照组之间有显著性差异。线图显示中药组、西药组、联合组及对照组均呈不同程度的上升趋势,其中对照组上升最明显;依次为中药组、西药组;联合组最低。综合检验及线图分析联合组对HCV-RNA滴度影响最大,其次为西药组,中药组无明显影响。结论:本实验研究表明(1)对照组即丙肝病毒感染后HepG2细胞上清中ApoB、VLDL、TG含量减少,且与时间呈正相关,与丙肝病毒载量呈负相关。(2)健脾清化方对丙肝病毒感染的HepG2细胞上清中ApoB、VLDL、TG含量具有调节作用。(3)联合组即健脾清化方加干扰素加利巴韦林组不仅对HepG2细胞上清中ApoB、VLDL、TG含量有调节作用,对丙肝病毒亦有明显的抑制作用,且优于西药组。(4)由此推断:健脾清化方可以提高干扰素抗丙肝病毒的疗效,其机制可能与改善脂质代谢有关。