Synaptotagmins(Syt)作为一大类膜转运蛋白家族，在酵母、霉菌、动物以及高等植物的基因中均发现有多个Syt的基因存在。在动物细胞中Syt起着钙传感器(Ca2+sensor)作用，在调控神经内分泌细胞胞吐和其他细胞胞吞作用中具有非常重要的作用。在植物细胞中，拟南芥基因组分析表明其含有6种Syt，本实验主要研究Synaptotagmin-likeproteinB(SytB)，生物信息学信息表明SytB是囊泡上的一个跨膜蛋白，N端位于囊泡内部，存在C2保守区域，在拟南芥各个组织中均有表达，在花粉和根冠细胞中表达水平较高。 为了探测SytB在植物细胞中的定位和其功能，本实验利用RT-PCR获得该基因，并构建了在花粉和体细胞表达的真核表达载体。利用基因枪瞬时转染野生型烟草花粉和稳定转染拟南芥悬浮细胞，并结合药物处理实验，研究SytB在花粉和体细胞中的定位和功能。此外，也构建了原核表达载体进行pull-down和IP工作，期望寻找其相互作用蛋白，间接研究其功能。并购买了SytB的T-DNA插入突变体，在植株水平研究SytB的功能。 通过使甩GFP标记SytB，和运用胞吞指示剂FM4-64和囊泡标记物SynaptotagminC2发现SytB在花粉细胞壁周围以颗粒状存在，在花粉顶端与胞质环流交汇处分布较少，不与FM4-64标记的内吞小泡共定位，但与SynaptotagminC2标记的囊泡基本共定位，并且与高尔基体有部分共定位，但是提高花粉萌发液中的Ca2+浓度后发现其在花粉极顶端分布增多，并且每一个层面上SytB分布明显增多，运动速度加快。在胞吐抑制剂BFA处理之后发现，SytB在花粉管中的颗粒明显增大，颗粒数目减少，与高尔基体基本不再共定位。这些结果表明SytB定位在囊泡上，很可能来自于高尔基体，而不是内吞小泡。SytB的分布和运动受Ca2+影响，当胞吐受到抑制时，细胞内部SytB能够形成较大的颗粒，这个颗粒很可能是由囊泡融合或SytB自身聚集造成的，表明SytB很可能参与胞吐过程。 我们构建了真核表达载体Timer-sytB(Timer是一种变色荧光蛋白，随时间的延长能够由绿色变为红色)，并将其稳定转染拟南芥悬浮细胞。研究发现SytB主要分布在细胞核周围和细胞壁附近，并在新生的细胞壁周围分布较多，绿色荧光标记的SytB主要存在于细胞核周围，红色荧光标记的SytB主要分布在细胞壁周围。使用BFA处理后，发现了在这些悬浮细胞中与上述在花粉中用BFA处理后的现象一致。用Oryzalin解聚微管后发现，绿色荧光的SytB大大减少，红色荧光的SytB明显地弥散分布于细胞膜，表明SytB蛋白特异性运输、分布和表达与微管有关。通过反义的方法将SytB敲除，发现细胞和囊泡都明显增大，且出现多核。这表明SytB参与了囊泡的形成，新生细胞板的形成以及细胞分裂。