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目的:探讨hsa-microRNA-146b-5p(miR-146b-5p)的表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者免疫亚型及预后的相关关系。方法:(1)收集山西医科大学附属省肿瘤医院病理科有详尽随访资料的DLBCL患者的石蜡样本62例,应用免疫组化EnVision法对所有样本进行CD20、CD3、CD10、bcl-6、Mum-1免疫标记,根据Han’s分类方法将DLBCL划分为生发中心B细胞(GCB)型和非生发中心B细胞(non-GCB)型;根据前期Agilent HumanmiRNA16.0高密度芯片对24例DLBCL患者的石蜡标本进行的预后miRNA表达谱筛选结果,采用qRT-PCR方法对所有样本进行miR-146b-5p表达水平的验证。11例淋巴结反应性增生为对照。(2)分别应用PCR方法从人基因组中扩增miR-146b-5p的前体片段,化学合成方法合成miR-146b-5p的类似物,并分别将其克隆入pGC-LV慢病毒表达载体中,经双酶切及测序鉴定,利用脂质体pofectamine2000将鉴定的阳性重组载体与辅助原件载体质粒pHelper1.0和pHelper2.0共同导入感受态细胞293T细胞进行慢病毒包装,使用逐孔稀释滴度测定法检测慢病毒滴度。(3)应用qRT-PCR方法检测人DLBCL细胞株DB、SUDHL-4、OCI-LY1、OCI-LY3、OCI-LY8、OCI-LY10、RJ-LY1和RJ-LY2中miR-146b-5p的表达情况。结果:(1)miR-146b-5p在DLBCL患者中的表达水平是淋巴结反性增生的5.4倍,差异有统计学意义(P=0.001);62例DLBCL患者中,GCB型共22例(35.5%),non-GCB型共40例(64.5%),miR-146b-5p在GCB型患者中的表达水平明显高于non-GCB型,差异有统计学意义(P=0.006);所有患者中,复发者35例(56.5%),无复发组患者miR-146b-5p的表达水平明显高于复发组,差异有统计学意义(P=0.004)。另外,DLBCL患者中miR-146b-5p高表达组(>中位值)的无复发生存(RFS)率明显高于低表达组(<中位值),差异有统计学意义(P=0.005),miR-146b-5p的表达与患者的总体生存(OS)率没有明显相关性。多因素COX模型分析,显示miR-146b-5p低表达(<中位值)、国际预后指数(IPI)≥3分均为各自独立的预后不良因素。(2)成功构建miR-146b-5p过表达和抑制的重组慢病毒载体,经荧光表达和实时荧光定量PCR验证,成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.0×109-1.5×109TU/mL之间。(3)miR-146b-5p在7种人DLBCL细胞株中的表达差异显著,在细胞株OCI-LY8(GCB型)中表达最高,在RJ-LY1(non-GCB型)中表达最低。结论:(1)DLBCL患者无复发组miR-146b-5p的表达水平明显高于复发组,并且miR-146b-5p高表达组RFS率明显高于低表达组,提示miR-146b-5p可能是DLBCL患者风险评估中的个新型分子标记;石蜡样本和细胞实验均表明miR-146b-5p在GCB型中的表达明显高于non-GCB型,提示miR-146b-5p可用于鉴别两种免疫亚型;成功构建miR-146b-5p过表达和抑制的慢病毒载体,为特异性过表达和抑制miR-146b-5p进行后续功能和靶向治疗研究奠定了实验室基础。