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本文对青少年特发性脊柱侧凸青春期软骨内成骨异常的分子生物学相关问题进行了研究。文章分为三个部分:
第一部分青少年特发性脊柱侧凸青春期生长发育异常的大体形态测量学研究。对256例12~16岁特发性脊柱侧凸女性患儿的大体形态学资料进行分析,观测指标包括身高、坐高、臂长及月经状况。采用Bjure公式计算校正身高及校正坐高。对照组为462例同年龄健康非侧凸女孩。从研究群体看,侧凸组的身高、坐高以及臂长与对照组相比无统计学差异(P>0.05),但校正身高、校正坐高显著高于对照组(P<0.01),且月经来潮要早于对照组(P<0.01)。从各年龄组看,12岁时,侧凸组的校正身高、校正坐高、臂长与对照组相比无统计学差异(P>0.05),甚至侧凸组校正前平均身高要矮于对照组。13~15岁,侧凸组的校正身高、校正坐高、臂长要显著高于对照组(P<0.01)。16岁时,侧凸组的校正身高及校正坐高略高于对照组(P<0.05),但身高、坐高以及臂长与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。研究表明青少年特发性脊柱侧凸患儿在青春期存在生长发育的异常,具体表现为校正身高、校正坐高、臂长等大体形态指标高于同年龄非侧凸组,这一现象可能与其发病机制有关。
第二部分青少年特发性脊柱侧凸hMSCs的体外分离、培养、扩增及表型鉴定。将30例志愿者分为2组:AIS组20例,年龄12~16岁,平均14.2岁。正常对照组10例,年龄12~18岁,平均14.6岁。无菌条件下分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法体外分离hMSCs,原代培养并传至P2代行细胞记数,同时记录细胞样本各代的增值时间。取P2代细胞经流式细胞仪行hMSCs的表型鉴定。结果显示,2组分离所得的原代单个核细胞均呈贴壁生长,体外培养24小时后细胞呈圆形,72小时后细胞逐渐变为长梭形,并呈集落样生长。P2代细胞总数平均可达1×107个。2组细胞各代平均增值时间无统计学差异(P>0.05),从P0~P2代平均约需28天。P2代单个核细胞经流式细胞仪鉴定其表型与hMSCs表面标记相符。研究表明:AIS患儿与正常对照组在体外分离、培养、扩增hMSCs时所表现的生长及增殖特性一致。
第三部分青少年特发性脊柱侧凸青春期软骨内成骨异常的分子生物学相关研究。探讨了膜表面受体STRO-1、BMPR—ⅠA/Ⅰ B、胞浆蛋白SMAD1、转录因子RUNX2及SOX9的表达与AIS青春期软骨内成骨异常可能相关的分子机制。采用RT—PCR法、Western blotting及免疫荧光法检测2组hMSCs膜表面BMPR—ⅠA/Ⅰ B分子、胞浆Smad1蛋白及转录因子RUNX2、SOX9的表达情况。研究表明:BMPs信号通路中膜表面分子BMPR—ⅠA/Ⅰ B、受体调节型蛋白Smad1以及转录因子RUNX2、SOX9在hMSCs水平的异常表达可能与AIS青春期软骨内成骨异常的分子机制相关。而可能与hMSCs池中骨祖细胞所占的比例无关。