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动物专用药物头孢噻呋,具有抗菌活性强、药代动力学特征优良、毒副作用小、残留低等优点。但近年来,随着第三代头孢菌素的广泛应用和滥用,细菌尤其革兰氏阴性菌迫于生存压力对其已经产生耐药性,且耐药菌株逐年增多。研究表明:革兰阴性菌对第三代头孢和新的β‐内酰胺环类抗生素耐药的主要机制,是产生了超广谱β‐内酰胺酶(extended spectrumβ‐ lactamase, ESBLs)和Ampc酶(Ampcβ‐l actamase);产生ESBLs细菌携带ESBLs质粒的同时,可能带有对喹诺酮类、氨基糖苷类和磺胺类等药物的多种耐药基因,使其具有多重耐药表型,给临床治疗带来严重的威胁,成为临床关注的焦点。为指导兽医临床科学、合理地使用兽药,降低产生ESBLs耐药菌带来的危害,进行了本论文试验研究。1.致病性大肠埃希菌ESBLs的检测及质粒传播研究(1)用试管二倍稀释法测定了177株猪、鸡大肠埃希菌(E.coli)临床分离株对头孢噻呋、阿莫西林、头孢曲松、头孢噻肟的敏感性。结果表明,它们对临床分离株的(minimal inhibitory concentration, MIC)值高于对大肠埃希菌标准菌株的MIC值。(2)用双纸片协同法进行了ESBLs的检测,ESBLs的阳性率是20.34 %;用PCR方法进行了ESBLs的DNA扩增,19.77 %菌株扩增出ESBLs的目的条带。以上两种检测方法检测结果差异不显著。PCR检测出2株菌含有TEM型ESBLs和SHV型ESBLs,1株含有TEM型ESBLs和CTX型ESBLs。(3)不同地区的TEM型ESBLs基因分析结果发现,大肠埃希菌(E.coli)新郑猪、鸡分离株产生的ESBLs和鸡大肠埃希菌(E.coli)中牟分离株产生的是同一种ESBLs;大肠埃希菌(E.coli)荥阳猪、鸡分离株产生的ESBLs关系很近。(4)以氨苄西林作为选择抗生素,以大肠埃希菌DH5α为受体菌,进行的ESBLs耐药质粒接合、传递试验结果表明,猪源、鸡源大肠埃希菌(E.coli)均能传递ESBLs耐药质粒至受体菌中。2.他唑巴坦的抑酶保护抗生素作用研究(1)用试管二倍稀释法测定了头孢噻呋(CEF)、头孢噻呋‐他唑巴坦(CEF-T)复方及头孢噻呋-他唑巴坦-恩诺沙星(CEF-T-EN)复方制剂对标准大肠埃希菌(C83845和C83907)及产生ESBLs大肠埃希菌荥阳分离株(E.coli荥阳-ESBLs)的最小抑菌浓度(MIC)值;结果表明:CEF-T复方对E.coli荥阳-ESBLs的MIC值是1.2μg/mL,较头孢噻呋单药降低了12.5倍,CEF-T-EN复方对该菌株的MIC值是1.2μg/mL,抗菌活性更高。(2)绘制出的CEF-T复方对E.coli荥阳-ESBLs的杀菌动力学曲线与头孢噻呋对C83845的杀菌动力学曲线相似,杀菌效果略差于CEF-T-EN复方制剂对E.coli荥阳-ESBLs的杀菌效果。(3)头孢噻呋和CEF-T复方对标准菌株C83845的抗菌后效应作用非常相似。但CEF-T-EN复方在相同MIC值的PAE明显强于头孢噻呋。对产酶耐药菌株E.coli荥阳-ESBLs的抗菌后效应图三种药之间表现出了相似性;他唑巴坦对E.coli荥阳-ESBLs的β-内酰胺酶抑制剂后效应(postβ-lactamase inhibitor effect, PLIE)曲线图显示:他唑巴坦有轻微的β-内酰胺酶抑制剂后效应(PLIE)。(4)用E.coli荥阳-ESBLs菌液(0.4mL∕只)对7日龄雏鸡腹腔注射(intraperitoneal injection, IP),制备耐药大肠埃希菌病模型。以感染不给药组为对照,用头孢噻呋单药粉针剂、混悬剂及CEF-T和CEF-T-EN复方混悬剂分别进行治疗。药物治疗结果,经SPSS11.5统计软件进行分析、X2检验表明:与感染对照组鸡只死亡率90%相比较,各治疗组雏鸡死亡率下降均显著(P<0.05)。头孢噻呋钠粉针治疗组的治愈效果优于头孢噻呋混悬液;CEF-T的治疗效果优于头孢噻呋;CEF-T-EN的治疗效果显著。3. ESBLs耐药质粒的逆转研究(1)头孢噻呋做底物,用亚抑菌浓度法对标准大肠埃希菌C83907和C83845进行诱导至产生ESBLs后,用传统质粒消除剂SDS做对照,进行了氯丙嗪、异丙嗪、地西泮、恩诺沙星、环丙沙星等质粒消除剂对ESBLs耐药质粒的体外消除研究。四环素(Tetracycline , TC)、红霉素(Erythromycin, EM)、利福平(Rifampin, RIF)对小白鼠去污染后,以SDS作对照,进行了氯丙嗪等质粒消除剂对ESBLs质粒的体内消除效果研究。结果表明,各种质粒消除的体内消除率与体外消除率基本相同,消除剂之间的消除效果相比较,三环类中枢神经系统抑制药物的消除效果好,适合用来阻止细菌耐药性的传播和发展.(2)收集体内和体外消除试验中得到的消除子,测定并比较了它们和质粒消除前原耐药菌对头孢噻呋等药物的MIC值,并以氨苄西林(ampicillin, AP)做诱导剂,进行了消除子耐药性的稳定性试验。结果表明:质粒消除子恢复了对头孢噻呋等的敏感性,但诱导50代后,对氨苄西林和阿莫西林耐药,诱导100代后,仍然对头孢噻呋和头孢曲松敏感。