细胞周期的进程主要是通过Cdk/cyclin激酶复合物的循环调控激活，不同的激酶复合物在细胞周期的不同时相发挥作用。其中，CDK2/cyclinE是中心体及DNA复制的关键调控者，其可以磷酸化与中心体复制相关的蛋白，调控中心体的复制。P21是CDK2-CyclinE的抑制剂，p53通过使p21的转录水平升高，而使CDK2-CyclinE的活性得到抑制，从而抑制中心体在细胞周期中的多次复制。在有丝分裂中，染色体的分离和核的重新组装均需要有功能的中心体。中心体的正常组成和分布保证染色体分离的准确性和出生后发育过程中的基因组稳定性。因此，本实验主要通过对CDK2和P53蛋白在牛卵母细胞体外成熟过程中分布和表达量的动态变化的研究，为阐明中心体的复制调控机制奠定基础，也为进一步阐明克隆胚胎染色体不稳定、发育停滞、发育率低等原因提供理论基础。研究结果如下：　　 1.通过孤雌激活和免疫荧光染色评价实验室已建立的牛卵母细胞体外成熟体系。本实验比较了两种激活方法和两种体外培养液对牛卵母细胞体外发育的影响，结果表明，采用A23187处理5min+6-DMAP处理6h激活后用mCRIaa培养液培养的方法，牛卵母细胞的卵裂率(88.82％)和囊胚率(44.81％)均较高。利用免疫荧光染色方法监测了牛卵母细胞体外成熟过程中GV期、GVBD期、MⅠ期、AⅠ期、TⅠ期、MⅡ期6个时期染色体和纺锤体的动态分布变化，并通过统计不同时期卵母细胞的数目揭示牛卵母细胞体外成熟不同培养时期核相动态变化。数据统计表明：成熟培养0h、7.5h、12.5h、16h、17.5h、22h时，分别处于上述对应6个时期卵母细胞的数目均较多。　　 2.针对体外成熟各个阶段的卵母细胞，运用SYBR Green I荧光定量PCR技术与免疫荧光染色方法，对上述牛卵母细胞体外成熟过程中6个时期中心体复制调控相关的两个蛋白-CDK2和P53蛋白进行了定量及定性研究。荧光定量结果表明：在GVBD期，CDK2蛋白与P53蛋白RNA水平的表达量最高，而在MⅠ期，其表达量最低。免疫荧光染色结果表明：不管是在正常细胞还是在异常细胞中，CDK2蛋白与P53蛋白均定位于染色体上，随染色体的变化发生相应的变化。异常纺锤体的出现，解释了体外受精胚胎和克隆胚胎染色体异常、体外发育率低的原因，为以后针对性改善克隆的健康状况奠定了理论基础。