mi RNAs在组织器官发育、疾病发生、细胞增殖凋亡等生物学过程中起着重要的调控作用。本课题组在前期研究中筛选出了具有组织普遍雄性偏向性的gga-mi R-2954,并在鸡成纤维细胞中通过双荧光素酶报告基因验证了其靶基因YY1。在哺乳动物身上已有大量研究表明YY1对肌生成有抑制作用,本研究拟在体外模拟生肌过程来研究gga-mi RNA-2954是否通过靶向基因YY1来调控肌肉发育过程。本研究结果如下:1.通过定量PCR构建gga-mi R-2954在不同胚胎期鸡胚腿肌中的时间表达谱,确认了gga-mi R-2954的雄性高表达模式,在E10-E18.5表达量较高,随后显著下降。2.在E13.5雄性腿肌的原位杂交结果表明gga-mi R-2954表达富集在胞质中,少量在细胞核中表达。在体外对成肌细胞进行诱导分化后,定量检测发现gga-mi R-2954的表达量随着分化天数的增加而升高,YY1则相反。3.在鸡成肌细胞中进行gga-mi RNA-2954的超表达和抑制实验,并通过CCK-8、Ed U和定量PCR检测转染后细胞增殖情况及周期相关基因CCND1和CDK6的表达,结果表明gga-mi R-2954抑制成肌细胞增殖;诱导分化后通过定量PCR检测分化基因Myo G、My HC的表达和My HC免疫荧光,结果表明gga-mi R-2954促进成肌细胞的分化。4.在鸡成肌细胞中的增殖和分化期中,通过定量PCR和Western Blot证实了gga-mi R-2954确实抑制YY1的表达,而且YY1促进成肌细胞增殖抑制分化。当gga-mi R-2954 mimics与pc DNA3.1-YY1共同转染细胞时,YY1挽救了由于gga-mi R-2954超表达引起的细胞增殖减少,并抑制了细胞进一步分化。以上结果揭示了gga-mi R-2954在雄胚骨骼肌生长发育中的重要作用,在鸡成肌细胞中确定了gga-mi RNA-2954通过介导靶基因YY1来调控胚胎成肌细胞的增殖与分化过程。该调控机制的研究进一步完善了鸡中肌肉发育所涉及的分子调控通路,有助于揭示不同性别鸡胚肌纤维生长发育的调控过程。