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佛手(Fingered citron),学名(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle),是芸香科柑橘属枸橼的变种,具有极高的观赏、药用和经济价值。金华佛手精油是透明无色的液体,有柑橘属植株特有的味道,具有抗氧化、抗微生物、抗寄生虫、抗炎症、抗肿瘤、抗焦虑和抗抑郁等多种生物活性。本文确定了提取金华佛手精油的最佳工艺,探究高压均质法制备佛手精油纳米乳的配方和工艺,并研究佛手精油及其纳米乳的抑菌和抗肿瘤活性,为金华佛手精油的开发和应用提供了理论支持,主要内容如下:1、以佛手精油的得率为评价指标,采用水蒸气蒸馏法、酶法辅助水蒸气蒸馏法提取佛手精油,通过正交试验优化提取工艺,结果表明:水蒸气蒸馏法提取精油的最佳工艺为料液比(g/m L)1:4,2.0%NaCl(w/w),蒸馏3.0 h,精油得率为1.26%。酶法辅助水蒸气蒸馏法的最佳工艺为pH 5.0,50℃水浴酶解1.0 h,佛手精油得率为1.13%。采用GC-MS结合保留指数法鉴定出金华佛手精油的主要成分为D-柠檬烯和γ-松油烯。2、通过高压均质法制备佛手精油纳米乳(O/W型)。以佛手精油和中链甘油三酯(MCT)混合为油相,吐温(Tween-80)为表面活性剂,以粒径和多分散项系数(PDI)为评价指标,研究制备纳米乳的最佳配方和工艺,即:10%(w/w)油相,2.0%(w/w)表面活性剂,均质压力69 Mpa,均质3次,此工艺下制备的佛手精油纳米乳粒径大小为(112.53±2.25)nm,多分散项系数在0.3以下,具有较好的稳定性。3、采用牛津杯法研究佛手精油及其纳米乳对空肠弯曲杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠侵袭大肠杆菌、单细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌和假丝酵母菌等常见致病菌的生长抑制作用。以诺氟沙星溶液作为阳性对照,测定佛手精油及其纳米乳的最小抑菌浓度,结果表明:佛手精油及其纳米乳对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有良好的抑制作用,且纳米乳组的抑菌效果较精油组更佳。另外,佛手精油及其纳米乳对假丝酵母菌和空肠弯曲杆菌也有一定的抑制作用。4、研究佛手精油及其纳米乳对人结肠癌细胞(HT-29)增殖的抑制作用。采用倒置显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测精油及其纳米乳对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果表明:佛手精油及其纳米乳对HT-29细胞的增殖有明显的抑制作用且呈剂量依赖型,达到一定浓度后,佛手精油纳米乳的抑制效果明显优于佛手精油(P<0.05)。