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本文以褐牙鲆为研究对象,通过配制含有不同质量浓度大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素的细胞培养液,对褐牙鲆头肾巨噬细胞进行体外培养,测定巨噬细胞细胞免疫指标、免疫相关基因表达量以及LPS刺激后免疫相关基因表达量。试验主要测定了细胞呼吸爆发活力、增殖活力和吞噬活力以及白细胞介素-1β(IL-1β)、免疫球蛋白M(IgM)、干扰素-γ(IFN-γ)和热休克蛋白(HSP70)四种免疫相关基因表达量。研究结果如下: 1、大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素对褐牙鲆头肾巨噬细胞细胞免疫的影响 配制不同质量浓度大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素培养液,于96孔板培养褐牙鲆头肾巨噬细胞,24 h后测定细胞呼吸爆发活力、增殖活力及吞噬活力。结果表明:本实验条件下,大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素对褐牙鲆头肾巨噬细胞免疫力有显著影响(P<0.05),适当添加大豆异黄酮(0.5 mg/mL)、大豆苷元(0.4、0.6 mg/mL)、染料木素(0.1、0.2 mg/mL)时,对褐牙鲆头肾巨噬细胞的免疫力具有一定促进作用;但高浓度的大豆异黄酮(2 mg/mL)、大豆苷元(1.5 mg/mL)、染料木素(0.8 mg/mL以上)明显抑制细胞免疫力。 2、大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素对褐牙鲆头肾巨噬细胞免疫相关基因表达的影响 配制不同质量浓度大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素培养液,24孔板中培养褐牙鲆头肾巨噬细胞,6 h、12 h、24 h后提取细胞RNA,反转录后进行实时荧光定量PCR(qPCR),测定IL-1β、IgM、IFN-γ和HSP70基因表达量。结果表明:该培养条件下,大豆异黄酮、大豆苷元和染料木素对褐牙鲆头肾巨噬细胞免疫相关基因表达有显著影响(P<0.05),与其添加的质量浓度和培养时间相关,大豆异黄酮添加1 mg/mL左右时免疫基因表达量提高,而大豆苷元在0.4 mg/mL左右,染料木素在0.1、0.2 mg/mL时,方能提高免疫基因的表达量。 3、大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素在脂多糖(LPS)刺激下对免疫基因表达的影响 24孔板中细胞贴壁后,LPS终浓度为100 ng/mL的大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素梯度培养液孵育1.5 h后,换为无LPS的梯度培养液继续培养,0 h、3 h、6 h、12 h、24 h提取细胞RNA,反转录后进行qPCR,测定细胞IL-1β、IgM、IFN-γ和HSP70基因表达量。结果表明:大豆异黄酮添加量在0.5、1、1.5 mg/mL时,基因表达均显著高于对照组;大豆苷元添加0.4 mg/mL时效果显著;染料木素添加0.1、0.2 mg/mL时基因相对表达量显著高于对照组;IFN-γ和HSP70基因多在6h后出现显著差异。 因此,在本实验条件下,不同质量浓度大豆异黄酮、大豆苷元、染料木素添加对褐牙鲆头肾巨噬细胞免疫力和免疫相关基因的表达具有显著影响。适宜的添加能够提高其免疫力,促进免疫基因的表达。