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背景：生物治疗作为当今肿瘤治疗研究的热点，已成为继手术、放疗和化疗之后的第四大治疗非小细胞肺癌的方案。利用树突状细胞（DC）强大的抗原提呈功能，制备负载肿瘤抗原的DC疫苗，可以主动增强机体特异性抗肿瘤免疫应答。Toll样受体（TLR）作为一类重要的模式识别受体，通过上调DC表面主要组织相容性抗原（MHC）类分子和共刺激分子，诱导DC进一步分化，其在调控DC成熟的过程中发挥了关键作用。目的：TLR配体增强DC成熟度，电转染A549-RNA构建DC疫苗，对其诱导的抗肿瘤免疫效应进行体外评价，以期明确该DC疫苗的特异性抗肿瘤作用，探讨TLR信号通路在调控DC成熟过程中的促进作用。方法：用密度梯度离心法从外周富集血中分离单个核细胞（PBMC），以GM-CSF和IL-4体外诱导成未成熟树突状细胞（imDC），用传统Trizol一步法提取A549的总RNA，再以电穿孔法把A549的总RNA转染入imDC，分别用传统细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2）和改良细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、polyI:C、CpG ODN）刺激DC的成熟。实验分四组A：对照组，B：传统组，C：改良1组（IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI:C、CpG ODN），D：改良2组（IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、polyI:C、CpG ODN）。用RT-PCR检测RNA的转染效率，流式细胞术检测DC的表面标志、趋化因子受体和DC致敏T细胞的表面标志，酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL-12的分泌水平，MTT法检测T细胞的增殖。结果：（1）RT-PCR结果表明电穿孔法能使A549的总RNA成功转染入DC，并使DC表达以下肿瘤抗原：组织多肽特异性抗原（TPS）、癌胚抗原（CEA）和细胞角蛋白19片段（Cyfra21-1）。（2）不同方法均能诱导DC的成熟，其中以改良2组的DC成熟度最佳，DC表面标志CD83高达82%、CD1a高达86%；DC表面趋化因子受体CCR4、CCR5和CXCR3随着DCs成熟度的增加表达呈下降趋势，而CXCR4和CCR7随着DCs成熟度的增加表达呈上升趋势；CD8+T细胞比例（66.78±2.74）%明显高于其他组（P<0.05）；IL-12的分泌量（2385±128.98）pg/ml高于其他组（P<0.05）；刺激T细胞增殖活化的能力最强，刺激指数为64.43±5.88（P<0.05）。结论：TLR配体polyI:C和CpG ODN可以优化DC的成熟，电穿孔法转染A549-RNA的DC能有效表达肿瘤基因，改良细胞因子鸡尾酒是体外诱导DC成熟的有效方法。