【摘 要】
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菊花(Dendranthema×morifolium)是一种多年生宿根草本植物,其品种繁多,花色、花型多姿多彩,具有很高的观赏价值。如何改变其相关性状获得更多既满足观赏性,又满足花卉种植需求的品
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菊花(Dendranthema×morifolium)是一种多年生宿根草本植物,其品种繁多,花色、花型多姿多彩,具有很高的观赏价值。如何改变其相关性状获得更多既满足观赏性,又满足花卉种植需求的品种越来越引起人们的兴趣。青蒿(Artemisia carvifolia)是一种一年的生草本植物,普遍被作为一种砧木,用于菊花等一系列花卉的嫁接。表观遗传是指DNA序列之外的改变而导致的可遗传的变异,DNA甲基化是最早被研究的表观遗传形式。本研究通过克隆菊花和青蒿MET1基因,寻找两物种MET1基因中低同源性基因片段,构建只能干涉菊花而不能干涉青蒿的RNAi载体,为本实验室后期工作提供基础。以青蒿为砧木,一旦获得菊花DNA甲基转移酶基因的RNAi砧木,则可以成为诱导其它所有菊花品种DNA甲基化水平变化的平台,为菊花后续多样性的研究提供基础。通过同源克隆的方法分别从菊花和青蒿中获得MET1基因的部分同源片段,通过5’RACE和3’RACE技术获得菊花和青蒿MET1基因的剩余序列,最后经过拼接发现:菊花MET1基因的ORF长度为5040bp,青蒿MET1基因ORF长度为4932bp,两者均与山柳菊(Hieracium pilosella)拥有很高的同源性。通过生物信息学比对发现,菊花和青蒿两个物种之间MET1基因的同源性达到92.65%,同源性较低的区域只有2个,分别在菊花MET1基因第1767到第1867个以及第4021到第4123个碱基之间。从菊花中扩增与青蒿低同源的MET1基因,该片段在菊花MET1基因1767位置,引物设计位置在其两侧,扩增片段长度为253bp,最后将该片段正反向分别连接到DHpart27RNAiFADP1P4载体中。通过荧光定量PCR技术分别对菊花和青蒿根茎叶进行表达谱分析,实验结果显示,菊花MET1基因在根中表达量最高,叶子中排第二,在茎中的表达量是最低的;青蒿MET1基因在茎内表达量最高,根中排第二,在叶中的表达量是最低的。
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