研究目的:肺血管重构是肺动脉高压的重要病理改变。在肺血管重构过程中,肺血管平滑肌细胞表型转化,发生明显的去分化。炎症因子在平滑肌细胞去分化中扮演重要角色,而CD40/CD40L轴是介导炎症调节的中心环节。本文围绕CD40/CD40L轴调控平滑肌细胞去分化参与肺动脉高压血管重构的机制开展研究。研究方法:(1)用正常培养、sCD40L处理、缺氧诱导+sCD40L处理PASMCs,通过CCK8检测细胞增殖能力,qRT-PCR和Western Blot测定各组PA-SMC表面收缩型和合成型标志分子表达的变化,明确sCD40L及缺氧对PASMCs细胞生物学功能和分子表达影响。(2)通过ELISA检测细胞cAMP浓度和PKA活性,Western Blot测定Ca2+内流通道蛋白CaV1.2及外释通道蛋白RYR2表达水平,Fura-2/AM荧光探针法测定细胞内Ca2+浓度,研究sCD40L和缺氧对PASMCs细胞cAMP/PKA信号通路活性以及Ca2+浓度的影响。(3)用地高辛降低细胞内Ca2+浓度,研究细胞内Ca2+浓度与PASMCs细胞生物学功能和分子表达的关系。(4)通过cAMP激动剂激动cAMP/PKA,研究激动cAMP/PKA通路对细胞内Ca2+浓度及PASMCs细胞生物学功能和分子表达的影响。研究结果:(1)sCD40L处理后,PASMCs增殖能力升高,收缩型标志分子表达减少,分泌型标志分子表达增加。(2)sCD40L和缺氧诱导均可降低PASMCs细胞cAMP/PKA信号通路活性,使CaV1.2蛋白水平升高,而RYR2蛋白含量降低,细胞内Ca2+浓度升高。(3)地高辛处理后,PASMCs细胞内Ca2+降低,细胞增殖能力降低,收缩型标志分子表达增加,分泌型标志分子表达减少。(4)cAMP激动剂处理后,PASMCs中cAMP表达水平及PKA活性均显著提高,CaV1.2蛋白水平降低,而RYR2蛋白含量升高,细胞内Ca2+浓度降低,细胞增殖能力降低,收缩型标志分子表达增加,分泌型标志分子表达减少。研究结论:sCD40L通过抑制cAMP/PKA信号通路活性引起PASMCs中钙离子内流通道蛋白表达增多及外释通道蛋白表达减少,细胞内Ca2+浓度升高,从而促进PASMCs增殖及去分化。