干扰β-catenin信号通路对人胃癌细胞株miRNA表达谱的影响

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目的:本研究拟通过构建慢病毒载体介导干扰人胃癌AGS、MGC-803细胞系中β-catenin信号通路的活性,利用miRNA芯片技术寻找干扰后差异表达的miRNA表达谱,为进一步了解β-catenin信号通路及相关miRNA调控胃癌的机制打下基础。方法:构建干扰β-catenin基因(ctnnb1)的慢病毒,分别感染人胃癌AGS和MGC-803细胞系。实时荧光定量PCR和Western Blot检测干扰效率。将AGS细胞分两组:1)实验组:AGS干扰组,2)对照组:AGS细胞组;将MGC-803细胞分为两组:1)实验组:MGC-803干扰组,2)对照组:MGC-803细胞组。利用miRNA芯片筛选两种细胞干扰β-catenin后差异表达的miRNA,并通过qPCR技术验证部分芯片结果。结果:1、成功构建干扰β-catenin基因的慢病毒LV3-CTNNB1-homo-433与LV3-CTNNB1-homo-769。LV3-CTNNB1-homo-433对AGS细胞及MGC-803细胞均具有干扰作用,LV3-CTNNB1-homo-769对AGS细胞无干扰作用,对MGC-803细胞有干扰作用。2、感染LV3-CTNNB1-homo-433后,AGS细胞、MGC-803细胞中miRNA表达谱产生明显变化。其中,AGS干扰组较AGS细胞组有40个miRNA上调,32个miRNA下调;MGC-803干扰组较MGC-803细胞组有56个miRNA上调,86个miRNA下调。3、qPCR验证hsa-miR-135b-5p、hsa-miR-210表达,结果与芯片结果基本一致。结论:干扰β-catenin信号通路对人胃癌AGS、MGC-803细胞的miRNA表达谱有影响。β-catenin信号通路可能通过调控miR-135b-5p、miR-210对胃癌产生影响。
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