论文部分内容阅读
研究目的:食管癌是一种常见的消化道肿瘤,以外科手术为主、辅以放化疗是该疾病目前的标准治疗模式,但根治性手术带来的巨大创伤以及放化疗导致的严重不良反应限制了传统治疗的发展。研究食管癌发生发展和侵袭转移机制、寻找新的分子靶点成为食管癌治疗研究的新方向,人类c-Myc启动子结合蛋白(MBP-1)是人类宫颈癌细胞HeLa细胞cDNA表达库中克隆出的一个新基因,它可以结合在c-Myc基因P2启动子的TATA盒上,对c-Myc起着负调节作用,尽管研究表明MBP-1的过量表达对一些癌细胞的增殖具有抑制作用,但对其在食管癌细胞中的作用,还未见报道。本实验着眼于构建MBP-1重组真核表达质粒,人为造成MBP-1在食管癌细胞过量表达的基础上,研究MBP-1对食管癌细胞增殖及凋亡的影响。实验方法:针对MBP-1基因设计引物,以质粒pcDNA3.1(+)为载体,将质粒pcDNA3.1(+)与MBP-1基因片段进行嵌合,构建了重组表达质粒pcDNA3.1(+)/mbp-1。以脂质体为载体,体外转染食管癌细胞株Eca-109,采用RT-PCR及Westernblot的方法检测MBP-1在食管癌细胞中的表达情况。在此基础上,进一步采用MTT细胞增殖检测实验及凋亡检测试剂YO-PRO-1检测MBP-1的过量表达对食管癌细胞增殖和凋亡的影响。实验结果:成功地将质粒pcDNA3.1(+)与MBP-1基因片段进行定向重组,构建了重组表达质粒(命名为pcDNA3.1(+)/mbp-1)。随后,通过RT-PCR及Westernblot检测证实,将重组质粒pcDNA3.1(+)/mbp-1体外转染食管癌细胞Eca-109后,可使MBP-在Eca-109细胞过量表达,在此基础上进一步采用MTT法检测显示,转染重组质粒pcDNA3.1(+)/mbp-1的食管癌细胞的增殖活性明显低于脂质体及空质粒转染的食管癌细胞,其组间差异具有统计学意义(P<0.05)。凋亡检测实验表明,转染重组质粒pcDNA3.1(+)/mbp-1的食管癌细胞其细胞凋亡率在转染后72小时明显高于脂质体和空白质粒转染细胞,其组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究发现人c-Myc启动子结合蛋白(MBP-1)的过量表达可以抑制了食管癌细胞的增殖,并促进其凋亡,本研究结果为以MBP-1作为分子靶点的食管癌基因治疗等研究奠定了基础。