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背景:
在我国,大多数的人在其一生中都有过腰背痛的经历,腰背痛及其伴随的脊柱退行性改变成为骨科的常见病,其高额的医疗花费以及对患者身心所造成的损害,对个人和社会均造成了巨大负担。目前,椎间盘的退行性改变被认为是引起腰背痛的首要原因,当前临床上主要通过保守治疗以及手术治疗的方法进行干预治疗,但无论何种方法,都只能对于已出现的症状进行对症治疗,并不能够从根本上延缓甚至逆转椎间盘退变。目前,针对椎间盘退变的生物学修复的细胞移植治疗为治疗这一疾病提供了一种新的思路。其中,通过移植BMSCs来延缓、修复椎间盘退变成为研究热点。有学者已经在动物实验中证明,体外共培养时,BMSCs和NPCs的相互作用能促使BMSCs向类髓核表型分化同时促进NPCs分化增殖和特征性物质表达。这为BMSCs移植治疗椎间盘退变提供了理论依据。本实验将人BMSCs分别与人正常及退变NPCs进行共培养,研究其类髓核分化效应及其对NPCs表型的调节作用。
目的:
探讨入骨髓问充质干细胞分别与正常及退变髓核细胞共培养后的类髓核分化效应及其对髓核细胞表型的调节作用,并进行比较。
方法:
分别取来源于腰椎退变病人以及脊柱侧弯病人的间盘组织,通过改良Pfirrmann法对其退变程度进行分级,进行髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的分离培养及鉴定,通过术中椎弓根钉道取血,对骨髓间充质干细胞(bone marrow-drived mesenchymal stem cells,BMSCs)分离培养并进行鉴定。取传至第三代细胞进行共培养。建立5个培养组:BMSCs单独培养组,退变NPCs单独培养组,正常NPCs单独培养组,BMSCs与退变NPCs共培养组,BMSCs与正常NPCs共培养组。选用去掉挂臂的transwell小室来进行细胞共培养,其小室的底部为聚碳酸酯透水膜(孔隙0.4μm),这使BMSCs分泌的一些因子能够通过半透膜起作用,同时半透膜的存在,又能将两种细胞分隔开来,利于细胞的观察以及之后细胞的分离和结果的检测。共培养7天后,RT-PCR法检测各组细胞SOX-9、聚集蛋白聚糖Aggrecan与Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达。
结果:
相较于BMSCs单独培养组,共培养组BMSCs的SOX-9、Aggrecan与Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达均有明显增加(p<0.05)。同时与BMSCs与正常NPCs共培养组相比,BMSCs与退变NPCs共培养组BMSCs的SOX-9、Aggrecan与Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达均有明显增加(p<0.05)。与退变NPCs单独培养组相比,共培养组退变NPCs的SOX-9、Aggrecan与Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达均明显增加(p<0.01)。与正常NPCs单独培养组相比,共培养组正常NPCs的SOX-9、Aggrecan与Ⅱ型胶原蛋白的mRNA表达均明显增加(p<0.01)。
结论:
1.BMSCs与NPCs共培养时的相互作用能促使BMSCs向类髓核表型分化,
2.较之正常NPCs,退变NPCs与BMSCs共培养时能更明显的促进BMSCs向类髓核表型分化。
3.BMSCs对NPCs的调节作用能促进其特征性相关基因表达,与退变NPCs共培养时,这一效应依然明显。