利用矮化砧木是实现苹果矮化密植栽培的重要手段,也是苹果栽培发展的必然趋势。苹果矮化砧果苗具有早果、丰产、优质、高效等优点,因此国内外学者对矮化砧木的育种十分重视,并已选育出大批具有不同优良性状的矮化砧木。但这些矮化砧木也存在着自身的缺陷,利用离体叶片再生技术是改良砧木的有效途径,具有极为重要的意义。 本研究以苹果矮化砧木P₅₉和SH₄₀为试材,对影响叶片再生的主要因素即激素种类及配比、叶外植体的选择及处理、培养条件、叶片极性、成熟度等多方面进行研究,以期建立P₅₉和SH₄₀高效、稳定的叶片再生体系,从而为其遗传改良奠定基础,同时对不定芽再生过程中内源多胺和激素的变化进行研究,以期为叶片再生不定芽的调控提供理论依据。主要研究结果如下: 1、不同产地琼脂及浓度对试管苗的生长状态有很大的影响。研究发现,使用青岛琼脂时,试管苗生长粗壮,茎叶形态正常,叶色浓绿,叶片较老。使用广东琼脂时,部分试管苗茎叶畸形,叶片嫩绿,玻璃化现象严重,提高琼脂浓度,可显著减少玻璃化现象。使用广东与青岛琼脂组合时,在广东琼脂不高于5.0 g/L的情况下,试管苗生长粗壮,茎叶形态正常,叶色嫩绿,无玻璃化现象。综合株高、节间长度和顶部叶片数各指标及试管苗生长情况考虑,使用广东琼脂4.0g/L+青岛琼脂2.0g/L组合,试管苗生长状态最好。 2、不同植物生长调节剂对叶片再生影响很大。研究发现,细胞分裂素BA和TDZ均可显著提高P₅₉和SH₄₀叶片再生率,但用TDZ再生效果最好,其效率比BA高出许多倍。TDZ诱导P₅₉和SH₄₀离体叶片分化不定芽的最佳浓度分别为2.0 mg/L、8.0mg/L,再生率可分别达到85.62%、74.52%。生长素NAA对诱导叶片再生不定芽是必需的,在只含细胞分裂素不含生长素的再生培养基中,P₅₉叶片不能再生不定芽,加入一定浓度的生长素NAA后,叶片却有了一定的再生能力。NAA最适宜的浓度为0.1mg/L。 3、暗培养对叶片再生不定芽是必要的。研究发现,叶片接种后完全光照培养不能再生不定芽,经过暗培养处理可显著提高叶片再生率,但暗培养时间过长会抑制不定芽的再生,最适宜的暗培养时间为20d。 4、试管苗的苗龄对叶片再生有一定的影响。研究发现,苗龄过小,叶片发育不成熟,叶片面积很小,再生率低;苗龄过老,叶片衰老,再生能力下降,最适宜的苗龄时间为25～30d。 5、同一叶片不同部位的再生能力有很大差异。研究发现,叶片基部再生能力最强,其次为叶片中部,叶片顶部的再生能力最差。 6、操作方式对叶片再生不定芽有很大的影响。研究发现,切割明显促进叶片再生,叶片正放再生效率优于反放。 7、不同的添加物对叶片再生影响不同。研究发现,在一定浓度的细胞分裂素范围内,CH可显著提高叶片再生率;AgNO₃抑制不定芽的再生,使用AgNO₃后再生