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我国一直以来都是猪肉消费大国,近年来生猪养殖规模不断扩大,但由于应激对猪的福利和生产性能产生不良影响,集约化养猪场的应激问题日益引起人们的关注。由各种应激原(免疫、运输、高温、低温、微生物感染等)引起的应激使机体发生代谢紊乱,甚至出现损伤及死亡,造成了巨大的经济损失。因此,本试验期望寻找一组检测应激的适宜指标,为应激的检测及猪群健康状态的监控提供一定的帮助。本研究首先以小鼠为模型动物,通过灌胃地塞米松(DEX,dexamethasone)模拟了应激反应,观察小鼠应激后糖皮质激素受体、细胞因子、热休克蛋白、急性期蛋白的表达规律,期望初步筛选出潜在的应激检测指标。还分离了小鼠原代肝细胞,通过DEX给药试验从细胞水平研究了上述指标的变化规律。在上述小鼠试验的基础上,又以生产实际中最常见的免疫应激和运输应激为研究对象,利用Q-PCR检测了急性期蛋白和细胞因子的变化规律,又通过ELISA检测血清中的浓度变化来验证,最终筛选出一组适宜的应激检测指标。主要研究内容如下:1.小鼠应激时糖皮质激素受体、细胞因子、热休克蛋白、急性期蛋白的变化规律利用Q-PCR技术检测应激时不同时间点肝组织糖皮质激素受体、细胞因子、热休克蛋白、急性期蛋白表达情况,结果发现糖皮质激素受体、细胞因子、急性期蛋白是潜在的应激检测指标。但是由于糖皮质激素受体是胞内受体,无法通过血液检测,最终认为细胞因子、急性期蛋白是适宜的应激检测指标。2.小鼠原代肝细胞的分离鉴定及DEX给药试验利用原位灌注法成功分离了小鼠原代肝细胞,并通过CK18间接免疫荧光鉴定。DEX给药试验显示只有糖皮质激素受体表达改变,其它指标未发生改变。结果说明应激是机体一种全身性的反应,单纯给予肝细胞糖皮质激素只会影响肝细胞糖皮质激素受体的表达。3.猪免疫应激和运输应激时临床症状及肝组织病理变化免疫应激和运输应激组都出现了明显的应激症状,表现为精神沉郁、呼吸急促等。通过HE染色发现肝组织显著的病理变化,且病理变化大致相同,都以肝细胞的肿胀及空泡化为主,这可能是应激时肝组织的非特异性损伤结果。4.猪免疫应激和运输应激时肝组织和血清中急性期蛋白和细胞因子表达规律首先通过Q-PCR技术检测免疫应激和运输应激时肝组织急性期蛋白和细胞因子表达规律,结果显示两组中IL-6的表达虽然出现改变但规律不同,载脂蛋白1(Apolipoprotein A1,Apo-A1)和猪主要急性期蛋白(Pig-major acute phase protein,Pig-MAP)这两种急性期蛋白的表达都出现了相同变化。又通过ELISA检测血清中的浓度来验证定量结果,结果与定量结果一致。IL-6变化规律不同,因此不适宜作为应激检测指标,但可以作为一个猪群的一个预警指标,高于或低于正常水平都预示着机体处于一个不健康的状态。MAP是一种正向急性期蛋白,在应激时会显著上调;Apo-A1是一种负向急性期蛋白,在应激时会显著下调。Apo-A1和MAP这两种急性期蛋白在应激时表达规律相反,这种组合相对于单一检测指标可以增加应激检测的准确性,相对于3个及以上检测指标组合也可以节约成本。因此,Apo-A1和MAP是猪免疫应激和运输应激适宜的应激检测指标组合。