目的：　　1. 调查分析衢州地区无偿献血人群中乙肝筛查情况，提供无偿献血人群中的乙肝流行病学数据。　　2. 评估开展核酸检测技术（NAT），衢州地区无偿献血血液经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测合格后的输血传播乙型肝炎病毒（HBV）残余风险的减少程度。　　3. 分析临床HBsAg低反应性患者的血清学模式，研究这类患者的血清核酸定量及基因型的相关性，并分析温州地区HBV基因型的分布特征。　　4. 初步分析本实验室PCR-荧光探针法检测基因型在HBsAg呈超低反应性时的检出能力，同时检测HBV S/前S区变异情况，并对其进行方法学评价。　　方法：　　1. 以衢州血站检验科2016年3月-2018年1月期间无偿献血者血液标本为样本，分别采用两种不同厂家的ELISA试剂和一种厂家的NAT试剂平行检测。两种ELISA试剂检测结果均阳性的标本，采用单人份NAT检测HBV DNA；单试剂阳性或者两种试剂检测均为阴性，则采用8个样本混样检测，如检测结果为反应性则需要进行单人份拆分检测，并用风险评估模型计算HBV的输血残余风险。　　2. 将衢州血站2016年3月到2018年1月的无偿献血者血液HBsAg和HBV DNA检测结果按性别、年龄、职业、文化程度、初次献血、重复献血还有S/CO值进行分层分析，对这期间的乙肝感染情况做一个回顾性调查。随机选取两种ELISA试剂检测阳性且SC/O值≦5、一种ELISA试剂检测阳性、ELISA检测阴性NAT检测阳性三组的标本，采用雅培发光定量进行血清学检测，分析上述三组的血清学模式。　　3. 选取临床首次发现HBsAg阳性且定量小于1000COI的患者标本，采用电化学发光法进行血清学定量检测，PCR-荧光探针法进行HBV-DNA定量检测以及HBV基因分型,并用SPSS 17.O统计软件分析上述标本的血清学、病毒学、HBV基因型特征及它们之间的相关性，两组数据组间比较采用秩和检验， spearman进行数据相关分析。　　4. 分别采用PCR-荧光探针法和巢式PCR结合Sanger测序法对9例特征临床标本进行基因分型，比较和评价两种HBV基因型检测方法，分析本实验室建立的PCR-荧光探针法在HBsAg呈低反应性时的HBV基因型检出能力。并将这些标本进行HBV S区/前S区变异检测，检测位点有HBV S区143S、118T、120P、145G位点以及Pre-S1缺失突变位点、Pre-S2 ATG突变位点。　　结果：　　1. 2016年3月-2018年1月期间衢州血站共采集52037人份无偿献血血液，乙肝项目不合格共273例（0.53%）。ELISA检测HBsAg阳性共206例(0.40%)，其中单试剂阳性57例，双试剂阳性149例。NAT检测HBV DNA阳性共211例，其中ELISA-/NAT+血液67例、ELISA+/NAT+血液137例、ELISA单试剂+/NAT+血液7例。ELISA双试剂+/NAT-血液12例。206例ELISA检测HBsAg为阳性的HBsAg SC/O平均值如下：新创11.02，索林12.98。ELISA 单试剂阳性的HBsAg SC/O平均值如下：新创1.73，索林2.02。乙肝项目不合格无偿献血血液共273例，献血者平均年龄为38.8周岁；以男性、初中以下学历、自由职业为主。三组血清学模式如下：50例HBsAg-/NAT+血液以抗-HBc+（5）单阳性为主要模式，有13例占26%；抗-HBs+抗-HBc+(2-5)模式有12例，占24%。22例HBsAg单试剂阳性血液以HBsAg+抗-HBe+抗-HBc+(1-4-5)为主要模式，有9例占40.9%。32例HBsAg双试剂检测SC/O值均值＜5的血液以HBsAg+抗-HBe+抗-HBc+(1-4-5)模式为主，有24例，占75%。　　2. 52037份无偿献血血液中首次献血者血液19102人份、重复献血者血液32935人份，其中149例ELISA双试剂检阳性血液以初次献血血液为主，共146人份占98%；57例ELISA单试剂阳性血液以初次献血者血液为主，有36例占63.2%，67例ELISA-/NAT+血液以重复献血者血液为主有45例占67.2%。根据输血残余风险评估“发病率/窗口期”数学模型计算公式，计算ELISA检测后的血液HBV残余风险为28.75×10 -5，NAT检测后的血液HBV残余风险为13.95 × 10 -5 ，乙型肝炎病毒核酸检测降低输血感染残余风险残余为51.5%。　　3. 146例HBsAg 阳性且定量水平小于1000COI患者中血清学模式以HBsAg+抗-HBe+抗-HBc+(1-4-5)为主，占50%；HBsAg+ HBeAg+抗-HBc+(1-3-5)次之，占21.92%；NAT检测结果阳性有86例，占58.9%；NAT检测结果阴性有60例，占41.1%。HBsAg与HBeAg呈正相关（ r=0.503) ， HBsAg与HBVDNAlog值亦呈正相关（r=0.486）；HBeAg阴性组与HBeAg阳性组两组的HBsAg与HBVDNAlog值分别有统计学差异，P＜0.05。HBeAg阴性组的HBsAg、HBVDNAlog值均低于HBeAg阳性组；不同DNA载量水平组HBsAg、HBeAg定量值的比较，三组之间的HBsAg、HBeAg浓度有统计学差异。DNA载量（lgIU/ML）≧6组的HBsAg、HBeAg浓度高于DNA载量（lgIU/ML）在3-6之间的组，后者HBsAg、HBeAg定量值又高于DNA载量（lgIU/ML）＜3 组。　　4. 146例患者标本中，有51例HBV基因分型成功，其中1例HBV-DNA定量=2.4×102IU/ML，其余50例HBV-DNA定量≧103IU/ML，分型结果为B型13例，占25.5%；C型38例，占74.5%。不同基因型在不同年龄和性别之间没有统计学意义；不同基因型组在HBeAg定量的比较，B基因组 HBeAg定量（秩均值=16.96）小于C基因型组（秩均值=29.09）p＜0.05有统计学意义；不同基因型组HBV DNA定量的比较，B基因组HBV DNA定量（秩均值=13.96）小于C基因型组（秩均值=30.12）,p＜0.05,有统计学意义。B基因型组HBsAg、HBeAg与HBVDNAlog值呈正相关（r=0.740），C基因型组HBsAg、HBeAg与HBVDNAlog值无相关性（r=0.184，P＞0.05）。　　5. PCR-荧光探针法HBV基因型检出结果：9例标本成功分型出5例，其中3例C型2例B型。巢式PCR结合Sanger测序法HBV基因型检出结果：9例标本成功分型出8例，其中4例B型4例C型。4例PCR法与测序法基因分型结果一致，1例两种方法结果不一致，PCR法检出结果C型而测序法为B型。将9例标本进行HBV S区/前S区位点突变检测，检测位点有HBV S区143S、118T、120P、145G位点以及Pre-S1缺失突变位点、Pre-S2 ATG突变位点。共检测9例标本，有2例未测序成功其余7例测序成功但均未发现HBV S区/前S区变异。　　结论：　　1. 衢州地区无偿献血血液HBsAg不合格率0.40%，低于衢州市人群的HBsAg阳性率的3.21％。ELISA检测阴性NAT检测阳性数67例，ELISA两种试剂检测阳性NAT检测结果为阴性12例，血清学和NAT互不可替代。　　2. NAT检测可较大程度地减少HBV的输血感染残余风险，为进一步确保临床输血安全提供有效价值。　　3. 无偿献血血液HBsAg阳性标本以HBsAg低反应性占较大比例，重视HBsAg低反应性问题的研究有助于提高临床输血安全。　　4. HBsAg-/NAT+无偿献血血液的血清学模式以抗-HBc+（5）单阳性为主要模式， HBsAg阳性的无偿献血血液以HBsAg+抗-HBe+抗-HBc+(1-4-5)“小三阳”为主要模式。临床HBsAg低反应性患者的血清学模式以HBsAg+抗-HBe+抗-HBc+(1-4-5)为主，HBsAg+HBeAg+抗-HBc+(1-3-5)次之。所以对于无症状HBV感染人群不可忽视，特别是抗-HBc单阳性献血人群存在HBV隐匿性感染的可能，对输血安全存在较大的隐患。　　5. 温州地区HBV基因型以C型为主，B型次之，未发现B/C混合型和D型。HBsAg低反应HBV C基因型患者的HBeAg定量和HBV DNA定量均高于B基因型;HBV B 基因型HBsAg、HBeAg与HBV DNA定量有一定的正相关性，但C基因型未发现这种相关性。深入研究HBsAg低反应性患者的HBV基因型与HBeAg表达和HBV DNA载量之间的关系对临床诊断、治疗及预后有一定临床意义。　　6. PCR-荧光探针法检测基因型基本可以满足临床需求，但当血清中HBsAg呈极低反应性时，即使HBV DNA定量达到分型要求，也容易出现分型失败的情况。而巢式PCR联合Sanger测序法在上述情况相对稳定，故当临床患者出现HBsAg超低反应性而HBV DNA定量大于103iu/ml时应高度引起重视，可以考虑联合Sanger测序法对低反应性标本进行HBV基因型检测。