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目的:本实验通过腹腔注射雨蛙素(1次/小时×13小时)制作BALB/c小鼠急性胰腺炎模型,腹腔给予TDZD-8(4-苄基-2-甲基-1,2,4-噻二唑烷-3,5-二酮),通过比较治疗组与模型组小鼠血淀粉酶(Amylase)、白介素-6(IL-6)水平,免疫组化法分析小鼠核因子表达,HE染色法观察比较不同组间小鼠胰腺病理损伤程度,参照Schmidts方法进行胰腺病理评分,探讨TDZD-8对小鼠急性胰腺炎模型的治疗作用及机制。
方法:随机选取健康雄性清洁级BALB/c小鼠54只,体重20±2g,河北医科大学实验动物中心提供,将以上小鼠随机分为对照组(C组),急性胰腺炎组(A组),TDZD-8治疗组(T组),各实验组根据3h,6h,12h不同时间点再分为3个亚组,每个亚组6只小鼠。急性胰腺炎模型制作采用腹腔注射雨蛙素(50μg/Kg体重),每小时注射一次,共注射13次。对照组腹腔注射等体积的生理盐水,每小时注射一次,共注射13次。TDZD-8治疗组在末次注射雨蛙素后半小时,腹腔注射TDZD-8(10mg/kg体重,溶于10%DMSO中),A组、C组分别在相同时间点注射等体积的10%DMSO。各组小鼠在相应的时间点分别采用摘眼球取血法取血,用于检测各组小鼠血液中血淀粉酶、IL-6水平,同时取小鼠胰腺组织,每个胰腺组织均分为两部分,立即用10%福尔马林溶液固定,其中一部分行HE染色,病理观察,另一部分行免疫组化检测NF-κB表达水平,实验数据采用spss13.0软件进行处理,两组数据采用t检验,血淀粉酶、血IL-6值多组数据比较采用方差分析SNK法,免疫组化评分与病理评分采用Kruskal-Wallis H检验及Mann-Whitney U检验,P<0.05表示差异具有统计学意义。
结果:
1、对照组血清淀粉酶水平各亚组内无明显差异,模型组、治疗组内各个亚组随时间延长,血清淀粉酶均呈升高趋势,其中模型组血淀粉酶水平从3小时组的3909.17±454.47U/L逐渐增加到5217.08±585.34U/L,治疗组血淀粉酶水平从3小时组的2644.87±307.86U/L逐渐增加到3872.84±350.31U/L。各个亚组间具有明显差异(P<0.05)。模型组与治疗组各亚组血清淀粉酶水平较对照组均有明显升高(P<0.05),而治疗组各时间点血淀粉酶水平与相同时间点模型组的水平相比均有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2、对照组各亚组内IL-6水平无明显差异,模型组与治疗组各时间点血IL-6水平与对照组比较有明显升高趋势,其中模型组血IL-6水平从3小时组的93.19±5.86U/L逐渐增加到144.42±19.49pg/ml,治疗组血IL-6水平从3小时组的71.91±6.72pg/ml逐渐增加到109.45±11.39pg/ml,且各个亚组内随着时间点延长,IL-6水平呈逐渐升高趋势,同时,治疗组各亚组内IL-6水平与同时间点模型组相比较,IL-6水平有所降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。
3、免疫组化检测显示,对照组中胰腺组织NF-κB少量表达,模型组NF-κB大量表达,治疗组胰腺组织中NF-κB表达较对照组明显增多,但与模型组相比,NF-κB表达有所减少(P<0.05)。
4、小鼠胰腺观察:对照组胰腺未见充血、水肿及渗出;模型组小鼠胰腺可见充血、水肿,同时可见腹腔内少量腹水;TDZD-8治疗组小鼠胰腺轻度肿胀、充血,未见明显腹水。
5、胰腺组织病理学评分结果:对照组胰腺无水肿、出血、炎细胞浸润及坏死,模型组胰腺小叶间隙增宽,腺泡水肿,片状坏死,实质及间质内可见大量炎症细胞浸润;治疗组胰腺可见炎症细胞浸润,但较A组有所减少,腺泡水肿,炎症程度较A组减轻,治疗组、模型组与对照组相比,病理评分具有显著性差异(P<0.05);模型组与治疗组各亚组随着时间点的延长,病理评分有增高趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1、急性胰腺炎时核因子表达增多,炎性因子数量增加,进一步引起胰腺损伤。
2、GSK3β抑制剂TDZD-8通过抑制GSK3β活性进而抑制NF-κB表达从而发挥对小鼠急性胰腺炎的治疗作用。