【摘 要】
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慢性牙周炎是最为常见的一类牙周炎,约占牙周炎发病率的95%。慢性牙周炎可发生于任何年龄段,随着年龄增长,患病率和疾病的严重程度也不断增加。牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的主要致病菌,而具核梭杆菌则在致病过程中起到了协助牙龈卟啉单胞菌共聚黏附的“桥梁”作用。本研究从204株乳杆菌中筛选出对慢性牙周炎有缓解作用并具有口腔益生特性的乳杆菌,并对其作用机制进行初探。主要研究内容和结果如下:(1)利用混菌生物膜
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慢性牙周炎是最为常见的一类牙周炎,约占牙周炎发病率的95%。慢性牙周炎可发生于任何年龄段,随着年龄增长,患病率和疾病的严重程度也不断增加。牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的主要致病菌,而具核梭杆菌则在致病过程中起到了协助牙龈卟啉单胞菌共聚黏附的“桥梁”作用。本研究从204株乳杆菌中筛选出对慢性牙周炎有缓解作用并具有口腔益生特性的乳杆菌,并对其作用机制进行初探。主要研究内容和结果如下:(1)利用混菌生物膜模型对204株乳杆菌进行筛选,以生物膜减少量为筛选指标进行初筛。而后利用牙周炎上皮细胞模型,以调节细胞炎症因子和调控紧密连接蛋白表达的能力进行复筛。筛选得到的植物乳杆菌CCFM1137和发酵乳杆菌CCFM1139对混菌生物膜的抑制率达40%以上,同时可以调节细胞表达炎症因子和紧密连接蛋白的水平。乳杆菌CCFM1137和CCFM1139对溶菌酶都表现出较高的耐受能力,并具有弱自成膜能力和较强的自聚共聚能力。因此筛选所得的植物乳杆菌CCFM1137和发酵乳杆菌CCFM1139不仅具有缓解牙周炎的作用,同时具有较好的口腔益生特性。(2)利用丝线结扎和牙周炎致病菌侵染结合的方式建立牙周炎大鼠模型,探究乳杆菌CCFM1137和CCFM1139在大鼠体内防治牙周炎的效果。经乳杆菌CCFM1137和CCFM1139防治后,能显著缓解大鼠因牙周炎引起的体重降低,减少牙周袋的形成,减轻牙龈红肿出血等症状。同时,乳杆菌CCFM1137和CCFM1139能够使牙周炎病原菌牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌在口腔中的定殖量降低1-2个数量级。此外,CCFM1137和CCFM1139对牙周炎过度的免疫反应也有一定调节作用,可以显著降低肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)-α、白细胞介素(Interleukin,IL)-1β和IL-8的分泌。CCFM1137和CCFM1139还可以防止骨质流失,降低牙槽骨孔隙率,使牙槽骨吸收量由5435.56μm分别恢复至3765.33μm和3222.67μm。(3)对乳杆菌CCFM1137和CCFM1139可能存在的作用机制进行初探发现两株乳杆菌均能够在生物膜形成的不同阶段减少生物膜形成量和产胞外多糖产量,还可以减少生物膜中具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的活菌数。两株乳杆菌可以显著下调具核梭杆菌外孔膜蛋白相关基因(fomA)和菌体黏附相关基因(fadA)的表达,抑制具核梭杆菌的生长和与其他致病菌的凝集。同时,两株乳杆菌可以调节牙龈卟啉单胞菌毒力因子精氨酸牙龈素基因(Rgp Acd)和菌毛基因(FimA)的表达,减少其对宿主的损害。发酵乳杆菌CCFM1139还可下调牙龈卟啉单胞菌毒力因子血凝素基因(HA-2)的表达。综上,植物乳杆菌CCFM1137和发酵乳杆菌CCFM1139是具有防治牙周炎效果的口腔益生菌,在益生菌口腔护理产品的开发中具有广阔的应用前景。
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