秀丽白虾（Exopalaemon modestus）在我国淡水渔业资源中具有重要地位,然而至今没有实现大规模人工养殖,相关研究尤显不足。本文首先对秀丽白虾的胚胎发育过程进行了系统的研究,在此基础上克隆了秀丽白虾的卵黄蛋白原基因（EmVg）及三种组织蛋白酶基因（EmCB,EmCD,EmCL）,并对其序列特征和表达模式进行了分析,结合它们在卵巢和胚胎发育中的表达特征,初步推测了其功能;接着从秀丽白虾卵巢中纯化出卵黄蛋白原,通过原核表达系统获得CB、CD、CL的重组蛋白。实验结果如下:1秀丽白虾胚胎发育的形态及组织学观察通过形态学和组织学的观察,发现秀丽白虾的胚胎发育可划分为7个时期:受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠期、无节幼体期、溞状幼体期、膜内糠虾幼体期。秀丽白虾受精卵的卵裂方式为表面卵裂,形成表面囊胚;囊胚层内陷继而形成原肠腔;在无节幼体前期和无节幼体后期先后形成7对附肢原基;进入溞状幼体期,腹部分节、心脏跳动,同时复眼色素出现;腹足开始发生是进入膜内糠虾幼体期的标志,随着发育的进行,复眼、附肢及各组织器官在膜内糠虾幼体后期已十分接近幼体,即将破膜而出。2秀丽白虾卵黄蛋白原基因（EmVg）cDNA的克隆、时空表达及卵黄蛋白原的纯化鉴定通过步移PCR扩增和cDNA末端快速扩增技术（Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE）获得了秀丽白虾Vg（EmVg）基因的cDNA全序列,并对其序列特征进行了分析。结果表明:Em Vg基因cDNA全长7810 bp,由长40 bp的5’非编码区（Untranslated Region,UTR）、165 bp的3’非编码区和7605 bp的开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）组成,编码2534个氨基酸,含有LPDN、DUF1943和VWD 3个保守结构域。实时荧光定量PCR技术结果显示,EmVg mRNA在秀丽白虾的肝胰腺和卵巢组织中表达相对较高;EmVg在卵巢发育过程中总体呈现先升高后降低的趋势,并在卵巢成熟期达到最高;在胚胎中表达微弱。通过离子交换层析和分子筛层析纯化得到了秀丽白虾的天然Vg蛋白,并经Nano-LC-ESI-MS/MS质谱鉴定,与蛋白库中脊尾白虾的Vg蛋白有85条肽段吻合,SDS-PAGE电泳显示其由四个亚基组成。3秀丽白虾组织蛋白酶基因（EmCB,EmCD,EmCL）cDNA的克隆、时空表达及原核表达通过PCR和RACE技术克隆了秀丽白虾的三种组织蛋白酶基因EmCB、EmCD和EmCL,cDNA 全长分别为 1795 bp、2329 bp、1095 bp,分别编码 331个、386个、324个氨基酸,预测蛋白质分子量为36.38 kDa、42.37 kDa、36.39 kDa。秀丽白虾的三种组织蛋白酶都具有信号肽、前导肽、成熟肽三部分,其中EmCB内有一个典型的“封闭环”结构与一个C2H2锌指结构域;EmCB和EmCL分别具有半胱氨酸蛋白酶的Cys、Asn、His活性位点各一个;EmCD有2个天冬氨酸蛋白酶Asn活性位点。实时荧光定量PCR技术检测显示,EmCB在卵巢中表达最高;EmCD则在血淋巴中表达量最高,在卵巢中的表达量次之;EmCL主要在肝胰腺中表达,在卵巢中则表达微弱。EmCB和EmCD在卵巢中的表达模式相似,随着卵巢的发育呈先上升后下降的趋势,在V期卵巢表达最高。在胚胎发育过程中,EmCD也与EmCB表现出相同的趋势,从卵裂期到原肠期表达上调并在原肠期达到最高,此后逐渐下降。将EmCB,EmCD和EmCL去掉信号肽的编码区通过原核表达系统成功表达出重组蛋白,经过包涵体复性与GST亲和纯化后获得的三种重组蛋白在体外未能显示出水解卵黄蛋白原的活性。根据上述实验结果,明确了秀丽白虾胚胎发育各时期的形态特征,初步推测EmVg、EmCB和EmCD基因对秀丽白虾的卵巢发育、胚胎发育具有重要的作用。研究其胚胎发育过程及期间涉及的相关生物分子,对秀丽白虾的人工繁殖及苗种生产提供了重要的基础资料,并具有潜在的应用价值。