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目的:
研究Rho激酶抑制剂法舒地尔(HA-1077)和VEGF对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)及向内皮定向分化的BMSCs迁移的影响；研究法舒地尔、VEGF刺激下，BMSCs迁移与ROCK表达及细胞骨架丝状肌动蛋白(F-actin)和纽蛋白(Vinculin)的关系，分析法舒地尔影响BMSCs迁移的机制。
方法:
1.采用密度梯度离心法，用密度1.077ml的淋巴细胞分离液，从大鼠骨髓中分离BMSCs，并于体外纯化、扩增。
2.EGM-2培养液诱导BMSCs 7～10d，所得细胞接种于明胶包被的玻片，分别行Ⅷ因子免疫组织化学和豆蔻凝集素直接免疫荧光染色鉴定。
3.细胞增殖试验按2×103个/孔将BMSCs接种于96孔板培养24h，更换含刺激因子的培养液培养24h，采用MTT法，酶标仪波长490nm检测OD值。每次实验设平行孔4孔，实验重复3次。
4.细胞趋化试验按1×105个/孔(1001u1)将细胞加入Transwell上室，下室加含刺激因素的培养液培养24h，细胞刮刮取外膜细胞，放入24孔板继续培养6h，MTT法，酶标仪490nm检测OD值，以OD值代表细胞迁移率。每次设平行孔2孔，实验重复3次。
5.细胞划痕试验按1×104个/孔将细胞接种于24孔板，90％融合后用10μl枪头于每孔中央划一垂直线，培养箱内静置6h。6h后加刺激因素分别于0、6、16h摄像。ScionImage图像处理系统处理照片，计算划痕面积愈合百分比。以创口愈合面积百分比代表细胞平行迁移率。每次设平行孔2孔，实验重复3次。
6.用罗丹明-鬼笔毒环肽和异硫氰酸荧光素-纽蛋白免疫荧光染色，荧光显微镜下观察高浓度各组和对照组细胞F-actin和Vinculin的改变。用Western blot检测高浓度各组和对照组细胞ROCKⅠ和：ROCK Ⅱ的表达。
7.实验分为4组：VEGF组、HA-1077组、VEGF+HA-1077组和对照组，前三组又分低、中、高三个浓度组。VEGF三浓度为10μg/l、30μg/L、50μg/L；HA-1077三浓度为10μmol/L、30μmol/l、50μmol/L。
结论:
1.法舒地尔、VEGF可促进BMSCs及向内皮定向分化的BMSCs迁移，二者联合应用对BMSCs穿膜迁移起协同作用。
2.法舒地尔通过抑制Rho激酶活性，使细胞内F-actin解聚和Vinculin减少，减弱细胞黏附力，从而加快BMSCs迁移。