子痫前期(Preeclampsia,PE)是妊娠期特有的疾病,是世界范围内导致孕产妇和围生儿高病率和死亡率的主要原因,严重威及母婴健康。其病因和发病机理仍不是十分清楚。　　大量研究表明妊娠期母体免疫失衡参与PE的发生和发展过程。调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)因其在维持自身耐受和介导人类母胎耐受中的重要作用成为众多学者研究的焦点。其数量缺乏和(或)功能缺陷与不孕症、复发性流产和PE的发生密切相关,尤其是PE。但是,Treg细胞数目和功能在PE中的变化仍然备受争议。此外,我们前期研究发现外周血中CD27+CD38-记忆B细胞数量增加、功能增强也参与PE的发生。但是Treg细胞和B细胞在PE中的调节关系尚不是十分清楚。近期研究表明,Treg细胞在体外和体内均可直接抑制B细胞的活性。鉴于Treg细胞和B细胞之间的这种调节关系,我们推测正是由于Treg细胞的某种缺陷从而导致了PE外周血中记忆B细胞数量的增加以及B细胞功能的增强。　　本研究以Treg细胞和B细胞为靶标,以同期正常晚孕妇女为对照,采用流式细胞分析技术,在体研究Treg细胞和B细胞的数量变化关系;采用免疫磁珠分选技术分别分离PE对象外周血中Treg细胞和B细胞,体外观察Treg细胞对B细胞增殖活性的影响。本研究结果将阐明Treg细胞调节B细胞在PE免疫学发病机制中的作用,为临床寻找新的免疫治疗靶标和制定有效的免疫治疗策略提供思路和理论依据。　　在体研究子痫前期患者外周血中Treg细胞和B细胞亚群的数量变化关系　　目的：探讨子痫前期患者外周血中Treg细胞和B细胞亚群的数量变化,并分析二者间数量变化的相长关系。　　方法：以32例子痫前期妇女为病例组,以40例同期正常晚孕妇女为对照组。收集所有对象外周血,采用密度梯度离心法分离单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),采用三色流式细胞技术检测CD4+T细胞亚群中CD4+CD25+细胞、CD4+Foxp3+细胞和CD4+CD25+Foxp3+细胞的百分比,以及CD19+B细胞各亚群的百分比。采用相关性分析评价Treg细胞和B细胞亚群数量变化的相长关系。　　结果：与正常对照相比,子痫前期患者外周血中CD4+Foxp3+细胞和CD4+CD25+Foxp3+细胞水平明显降低(P﹤0.01),但CD4+CD25+细胞百分比无差异(P﹥0.05);B细胞亚群中总的记忆B细胞(CD19+CD27+)和未转换的记忆B细胞亚群(CD27+IgD+)百分比较正常晚孕对照组明显增加(P﹤0.01),其余各B细胞亚群无明显差异。正常晚孕组CD4+CD25+细胞、CD4+Foxp3+细胞和CD4+CD25+Foxp3+细胞与各B细胞亚群之间均无明显的相关性,子痫前期组CD4+CD25+Foxp3+细胞与总的记忆B细胞(CD19+CD27+)和未转换的记忆B细胞亚群(CD27+IgD+)呈明显的负相关性(其相关系数及P值分别为r=-0.384,P=0.03;r=-0.402,P=0.023),CD4+CD25+细胞与未转换的记忆B细胞亚群(CD27+IgD+)呈负相关(r=-0.399,P=0.024),与总的记忆B细胞(CD19+CD27+)无相关性。CD4+Foxp3+细胞与各B细胞亚群均无相关关系。　　结论：外周血中Treg/记忆B细胞数量变化导致的免疫失衡参与子痫前期的发病,记忆B细胞数量的增加可能是由于Treg水平的降低所导致的。　　体外研究子痫前期患者外周血中Treg细胞对B细胞功能的影响　　目的：探讨子痫前期患者外周血中Treg细胞对B细胞增殖活性的影响。　　方法：以5例子痫前期妇女为病例组,以6例同期正常晚孕妇女为对照组。收集所有对象外周血,采用密度梯度离心法分离PBMC,并采用免疫磁珠技术分选CD4+CD25+Treg细胞和CD19+B细胞。Treg细胞和B细胞分别经IL-2、CD3、CD28和LPS刺激2天,再将B细胞与Treg共培养或单独培养5天,采用流式细胞术检测B细胞增殖水平。　　结果：正常晚孕组中,Treg细胞和B细胞共培养组与B细胞单独培养组相比,B细胞增殖指数(Proliferation Index,PI)及前体频率(Precursor Frequency,PF)的差异无统计学意义(P﹥0.05),而在子痫前期组中,共培养组B细胞PI和PF明显低于B细胞单独培养组(P﹤0.05);子痫前期的B细胞单独培养组与正常晚孕的相比,其B细胞PI和PF明显高于正常晚孕组(P﹤0.01),而子痫前期的共培养组B细胞PI与正常晚孕组相比,差异无统计学意义(P﹥0.05),但B细胞PF却明显高于正常晚孕组(P﹤0.05)。　　结论：子痫前期患者外周B细胞增殖活性增强,且其外周Treg细胞可抑制B细胞的增殖;表明Treg细胞数目的减少而非功能缺陷在子痫前期发病中起着更重要的作用。尽管Treg细胞尝试抑制B细胞在子痫前期中的异常活化,但是由于其数量的降低,这种对抗效应不明显。　　本研究的创新点　　1.研究视角新:以往的研究只是单方面从Treg细胞本身来探讨其在子痫前期发病中的作用,本研究另辟蹊径,从新的视角,即将两种免疫调节细胞—“Treg细胞”和“B细胞”结合起来,来探讨子痫前期新的免疫学发病机制。　　2.提出了新理论:从在体研究和体外研究两个层面,探讨了子痫前期患者外周血中Treg细胞数目和B细胞亚群的数量变化,以及Treg细胞对B细胞功能的影响,提出了Treg细胞/B细胞免疫失衡学说参与子痫前期的发病,进一步丰富子痫前期免疫学发病机制,为寻找新的治疗靶标提供了新的思路和实验依据。　　3.对其他领域的研究有一定的借鉴:更深入地了解和掌握Treg细胞对B细胞的调节作用,不仅将为子痫前期原创性研究做出贡献,而且将对解析其它妊娠相关性疾病(如复发性流产、胎盘早剥、II型妊娠糖尿病等)、器官移植耐受诱导、自身免疫性疾病、肿瘤、感染性疾病发生的机理有一定的参考和借鉴价值。