【摘 要】
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目的研究橄榄叶提取物（olive leaf extracts,OLE）对辐射小鼠外周血细胞、氧化损伤、骨髓细胞微核、凋亡调控蛋白Bax与Bcl-2表达等的影响,为橄榄叶提取物在辐射防护方面的开发应用提供实验支撑和理论依据。方法橄榄叶提取物中多酚含量的测定:采用超声辅助水提法制备橄榄叶提取物,利用福林酚比色法测定其多酚含量。OLE抗辐射损伤动物实验:将30只50日龄BALB/c小鼠（雄性）,随机分为
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目的研究橄榄叶提取物（olive leaf extracts,OLE）对辐射小鼠外周血细胞、氧化损伤、骨髓细胞微核、凋亡调控蛋白Bax与Bcl-2表达等的影响,为橄榄叶提取物在辐射防护方面的开发应用提供实验支撑和理论依据。方法橄榄叶提取物中多酚含量的测定:采用超声辅助水提法制备橄榄叶提取物,利用福林酚比色法测定其多酚含量。OLE抗辐射损伤动物实验:将30只50日龄BALB/c小鼠（雄性）,随机分为正常对照组、辐射对照组和OLE低、中、高剂量组,每组6只。低、中、高剂量OLE组分别灌胃给予150、500、1000 mg/kg OLE,正常与辐射对照组分别给予相同体积的生理盐水,每天1次,连续30日。第31日,辐射、OLE各剂量组小鼠均接受总剂量1 Gy（5 cGy/s,持续20 s）的X射线全身均匀辐照,正常对照小鼠不做任何处理。辐照后6～12 h内摘眼球取血,离心取血清,处死小鼠,采集股骨、肝脏、胸腺、脾脏等组织样本。指标测定:（1）外周血细胞计数:采用三分群血液细胞分析仪测定外周血细胞的数量,探讨OLE对辐射小鼠造血系统的影响;（2）肝脏病理变化:采用HE染色法观察辐射小鼠肝脏形态与病理变化,研究OLE对辐射小鼠肝脏损伤的防护作用;（3）氧化损伤:分别采用黄嘌呤氧化酶法（羟胺法）、酶促反应法和硫代巴比妥酸法（thiobarbituric acid,TBA）测定辐射小鼠血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平,研究OLE对辐射小鼠氧化损伤的防护作用;（4）骨髓微核率:采用Giemsa染色法观察并计数含微核的骨髓嗜多染红细胞,研究OLE对辐射小鼠染色体畸变与DNA损伤的保护作用;（5）凋亡相关蛋白表达检测:采用Western Blot法定量辐射小鼠肝脏中Bcl-2家族蛋白的表达情况,探讨OLE对调控辐射小鼠肝脏中凋亡调节蛋白基因水平的影响作用。结果（1）橄榄叶提取物中多酚含量丰富,高达（57.55±2.98）mg/g。（2）OLE对辐射小鼠造血系统的影响:中、高剂量OLE组小鼠的外周血白细胞数分别为（1.50±0.43）× 109个/L和（2.10±0.16）× 109个/L,血小板数分别为（330.33±10.16）× 109个/L 和（366.00±10.26）× 109个/L,均显著高于辐射对照组小鼠（P＜0.05）;高剂量OLE组小鼠红细胞数量为（5.43 ±0.29）× 1012个/L,明显高于辐射对照组（P＜0.05）。（3）OLE对辐射小鼠肝脏损伤的影响:辐射小鼠肝脏细胞排列紊乱、细胞间隙与肝索结构模糊,细胞肿胀、部分核皱缩甚至溶解,炎性细胞浸润明显,局部组织中央静脉出现淤血。中、高剂量OLE组小鼠肝脏细胞间隙较为紧密且排列规则,胞质空泡化改善,核皱缩程度减轻,肝索、肝窦清晰,炎性细胞减少,高剂量组小鼠肝脏形态接近正常小鼠。（4）OLE对辐射小鼠氧化损伤的影响:中、高剂量OLE组小鼠血清MDA含量分别为（13.25±0.63）nmol/mL 和（10.67±0.40）nmol/mL,显著低于辐射对照小鼠（P＜0.05）。中剂量OLE组小鼠血清SOD和GSH-Px活性分别为（101.27±12.77）U/mL 和（441.90±27.73）U/mL,高剂量 OLE 组小鼠血清 SOD 和 GSH-Px 活性分别为（110.42±16.73）U/mL 和（485.71±21.88）U/mL,均显著高于辐射对照小鼠。高剂量OLE组小鼠细胞中MDA含量和抗氧化酶活力,与中剂量组比较,差异均有显著性意义（P＜0.05）。（5）OLE对辐射小鼠染色体损伤的影响:中、高剂量OLE组小鼠的骨髓细胞PCE微核出现率分别为（1.93±0.53）‰和（1.60±0.46）‰,均显著低于辐射对照小鼠（P＜0.05）,而且高剂量OLE组骨髓微核率,较低、中剂量组均显著降低（P＜0.05）。（6）OLE对辐射小鼠肝脏凋亡蛋白表达的影响:与辐射对照组相比,中、高剂量OLE组小鼠肝脏Bcl-2蛋白表达水平均明显升高（P＜0.05）;两组小鼠的Bax蛋白表达水平均显著下降（P＜0.05）。高剂量OLE组小鼠肝脏Bcl-2家族蛋白的表达水平,与低、中剂量组相比,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论橄榄叶提取物中富含多酚物质,能够有效改善辐照小鼠外周血象,增强抗氧化酶活性,降低脂质过氧化水平,减轻肝脏炎性与遗传物质损伤,调控凋亡相关蛋白表达,抑制肝脏细胞凋亡,对X线照射造成的小鼠辐射损伤具有良好的防护作用。
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