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目的:心肌梗死(MI，myocardial infarction)对人类健康构成严重威胁。MI后心室重构的发生严重影响了MI患者的生活质量。MI后心功能不全已成为患者死亡的主要原因。目前尽管MI的死亡率下降，但MI后心功能不全仍未改善，已成为家庭及社会沉重的负担。心功能不全是各种心脏疾病的终末阶段。药物治疗可以缓解病情，但是无法使受损的心肌细胞再生。要使心肌细胞再生乃至衰竭的心脏恢复功能仍是一项巨大的挑战。干细胞治疗对于逆转终末期损伤心脏是最有希望的治疗方法。间充质干细胞(MSCs，mesenchymal stem cells)存在于多种成体组织内，骨髓是MSCs的主要来源。骨髓间充质干细胞(BMSCs,bone marrow mesenchymalstem cells)可参与受损心肌的重建，可以提高左室射血分数，降低左心室收缩末期和舒张末期容积、减少梗死面积并改善左室重构。由于MI后微环境的改变使BMSCs在梗死心肌中不能长期存活从而限制了干细胞的修复能力。人们试图通过基因工程的方法来解决这一问题。基因工程是将外源性基因导入目的细胞中，使得该细胞具备过表达或静默表达某种基因的能力。对干细胞加以基因修饰，使干细胞具有更好的促血管再生、抗细胞凋亡、抗炎、修复心功能的作用。外源性基因导入目的细胞中有病毒载体系统和非病毒载体系统。非病毒载体的转导效率低。目的基因只能实现瞬间表达，容易引发免疫反应和被机体所清除。本实验采用腺病毒转染BMSCs，转染效率高，无毒副作用。Bcl-2是具有明显抑制凋亡作用的基因，以Bcl-2修饰BMSCs可作为提高移植细胞存活率的手段。本研究目的在于观察经Bcl-2修饰的同种异体BMSCs移植对兔心梗后心功能不全模型心功能的影响。 方法:制备含目的基因Bcl-2的原始质粒。将目的基因Bcl-2从原始质粒上切下连接到pShuttle-CMV-EGFP重组穿梭载体。将验证正确的pShuttle-CMV-EGFP-Bcl-2转移到pAdeno载体上，得到pAdeno-Bcl-2病毒质粒。大量制备重组质粒，共转染293细胞，收集病毒(P1代病毒)。以P1代腺病毒感染293细胞，连续三代反复扩增收集病毒，至P4代行病毒的大量扩增。经反复冻融后保存，于-80℃保存待用。采集3月龄兔胫骨骨髓，用密度梯度离心法和贴壁法培养骨髓间充质干细胞至第九代。用带绿色荧光蛋白标记的空载体腺病毒及带有Bcl-2基因的腺病毒分别转染上述培养细胞。结扎冠状动脉前降支制作心功能不全模型。两周后根据超声心动图结果选取造模成功模型，即左室射血分数(LVEF，leftventricular ejection fraction)≤50％，并随机分为Ad-EGFP-Bcl-2组(n=6)、Ad-EGFP组(n=6)和DMEM组(n=6)。开胸进行细胞移植，Ad-EGFP-Bcl-2组移植Ad-EGFP-Bcl-2-BMSCs、Ad-EGFP组移植Ad-EGFP-BMSCs、DMEM组注入等量DMEM。4周后行心脏超声检查，测量LVEF、左室缩短率(FS，left ventricular fractional shortening)、左室舒张末内径(LVEDD，left ventricular end-diastolic diameter)、左室收缩末内径(LVESD，left ventricular end systolic diameter)，并用实时荧光定量PCR检测梗死边缘区心肌组织Bcl-2的表达。分析心功能与Bcl-2的表达的相关性。HE染色观察心肌病理改变，荧光显微镜下观察标记的骨髓间充质干细胞的生存。 结果: 1.Ad-Bcl2-GFP腺病毒滴度为2.5×1010PFU/ml; 2.采用密度梯度离心法和贴壁法成功培养出BMSCs，传至十二代细胞状态仍很好; 3.本实验采用第九代BMSCs，最佳MOI为500，感染36h后观察到EGFP表达，腺病毒转染率100％; 4.成功制备兔心梗后心功能不全模型，造模后存活21只，2周后根据心脏彩超结果及造模成功判定标准(LVEF≤50％)，共有18只造模成功。 5.Ad-EGFP-Bcl-2组和Ad-EGFP组与DMEM组相比，心功能改善均优于DMEM组，Ad-EGFP-Bcl-2组改善更明显。EF值[(68.222±3.763)％,(57.056±3.555)％,(47.389±5.567)％,P=0.000], EDD值[(9.556±0.981)mm,(11.611±0.828) mm,(13.389±1.569) mm,P=0.000], ESD值[(5.722±0.647)mm,(7.889±0.544) mm,(9.889±0.749)mm, P=0.000], FS值[(39.167±3.817)％，(31.833±2.492)％，(25.778±3.851)％，P=0.000]; 6.心肌梗死边缘区Bcl-2表达在Ad-EGFP-Bcl-2组明显提高(1.015±0.115，0.358±0.057，0.090±0.065，P=0.000)，差异均有统计学意义; 7.EF与Bcl-2表达呈正相关，相关系数R为0.940，决定系数R2为0.883，回归方程及所有系数均有统计学意义，回归方程为Y=46.664+22.329X; 8.移植细胞存活率提高了，在荧光显微镜下Ad-EGFP-Bcl-2组BMSCs数目是Ad-EGFP组的1.5倍; 9.Ad-EGFP-Bcl-2组和Ad-EGFP组与DMEM组相比，病理改变较轻，Ad-EGFP-Bcl-2组效果更好。 结论:间充质干细胞易于分离并且大量培养，易于被外源基因转染并稳定表达，同种间无免疫原性。本实验采用腺病毒转染BMSCs，转染效率高，无毒副作用。经Bcl-2修饰的同种异体骨髓间充质干细胞移植可更好地抑制心室重构，改善兔心梗后心功能。其机制可能与抑制凋亡、提高移植后干细胞存活率有关。