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第一部分NLS在PMI,定位及其与importin a相互作用机制研究目的通过间接免疫荧光技术验证PNL、PML(NLS-)胞内定位,以及通过间接免疫荧光技术和免疫共沉淀技术验证PML/PML(NLS-)与importin α之间的相互作用。方法构建真核表达质粒pCMV-HA-PML、pCMV-HA-PML (NLS-) 和pCMV-Myc-importin α并共转染HEK 293细胞,利用间接免疫荧光检测PML、PML(NLS-)胞内定位；利用免疫荧光双标法和免疫共沉淀分别验证PML/PML(NLS-)与importin α之间的相互作用；同时提取原代APL细胞、non-APL病人及正常人的中性粒细胞,运用Western blot,免疫荧光,检测中性粒细胞内PML(NLS-)蛋白的表达与定位。结果成功构建真核质粒pCMV-HA-PML、pCMV-HA-PML (NLS-)和pCMV-Myc-importin α;免疫荧光显示PML定位与胞核中呈斑点状,PML(NLS-)主要定位子胞浆；免疫共沉淀显示,使用兔抗HA多克隆抗体沉淀与HA-PML相互作用的蛋白,再用鼠抗Myc单克隆抗体进行Western blott检测,可以检测mportin α蛋白；沉淀HA-PML(NLS-)相互作用的蛋白则不可以检测到importin α蛋白；激光共聚焦显微镜下可观察到PML与importin α共定位于胞核内,PML(NLS-)与importin α不存在共定位；原代APL细胞表达PML (NLS-)蛋白并定位于细胞胞浆。而非APL病人和正常人的中性粒细胞胞浆中几乎没有PML (NLS-)表达,仅表达PML蛋白并定位于胞核。结论：PML蛋白通过其NLS序列与importin α相互作用介导入核；PML (NLS-)可以作为APL诊断标志。第二部分抗PML蛋白核定位信号(NLS)抗体的制备及其在APL诊断中的应用研究目的：以NLS多肽作为免疫原,制备抗PML蛋白抗体。方法：分析PML蛋白NLS序列免疫原性,合成NLS多肽；以此多肽作为免疫原,免疫三只小鼠,两周后加强免疫：末次免疫10天后取尾血制备抗体血清,以未免疫小鼠血清为对照,ELISA检测抗体效价；WESTERN BLOT与间接免疫荧光验证抗体特异性。结果：三支抗体血清ELISA检测均有阳性反应,其中2号抗体血清效价最高达1：50000,以2号抗体血清为一抗,western blot检测野生型PML蛋白分子量大小约为70KDa；免疫荧光显示PML位于胞核中呈斑点状。结论：成功制备了抗PML蛋白核定位信号序列的抗体,区别检测野生型PML蛋白和PML(NLS-)蛋白为APL临床诊断提供新的依据。