目的:采用新生SD大鼠建立高氧肺损伤动物模型,动态观察肺组织湿干重质量比和病理改变,检测高氧暴露各时相点新生大鼠肺组织中S r c抑制的蛋白激酶C的底物(Src suppressed C kinase substrate,SSeCKS)的表达,阐述SSeCKS蛋白与高氧肺损伤的关系;观察高氧刺激肺毛细血管内皮细胞中SSeCKS蛋白的表达及对细胞骨架的影响,探讨SSeCKS蛋白参与高氧肺损伤的病理机制。方法:1.64只出生12 h内的SD清洁级大鼠,随机分为2组:空气对照组、高氧暴露组,每组8只。高氧暴露组置于常压高氧舱中,保持氧浓度>95%,空气对照组置于同一室内,于12 h、24 h、48 h和72 h处死动物后分别进行肺组织湿干重质量比(W/D)、肺组织病理HE染色、Western blot法及间接免疫酶标法检测肺组织中SSeCKS蛋白的表达,间接免疫荧光双重标记法明确SSeCKS蛋白在肺组织的细胞定位。2.128只出生12 h内的SD清洁级大鼠,随机分为4组:I):空气对照组;II):高氧暴露组;III):高氧露+R031-8220(蛋白激酶C抑制剂)组;IV):高氧暴露+生理盐水组,每组8只。II、III、IV组置于常压高氧舱中,保持氧浓度>95%,I组置于同一室内,III组自高氧暴露第一天起腹腔注射R031-8220,连续3天,同时IV组腹腔注射生理盐水。分别于高氧暴露12 h、24 h、48 h、72 h处死动物,进行肺组织湿干重质量比(W/D)、病理HE染色检查,于高氧暴露72 h观察各组肺毛细血管内皮细胞中SSeCKS蛋白的表达及其与细胞骨架的关系。结果:1.高氧暴露各时相点肺组织中SSeCKS蛋白的表达与肺损伤12 h时相点:与空气对照组相比,高氧暴露组W/D、肺组织病理HE染色及SSeCKS蛋白表达无差异; 24 h时相点:高氧暴露组W/D无改变,病理HE染色肺泡内出现少量红细胞,肺泡壁增厚,开始出现急性肺损伤表现,SSeCKS蛋白表达开始增加;48 h时相点:高氧暴露组W/D增加,病理HE染色肺泡内红细胞增多,肺间隔增宽,粒细胞附壁,出现急性炎症反应和肺水肿,SSeCKS蛋白表达进一步增加;72 h时相点:高氧暴露组W/D进一步增加,病理HE染色,肺泡内可见大量的红细胞,肺泡间隔粒细胞浸润,炎症、水肿进一步加重,出现肺出血, SSeCKS蛋白表达达到最高,且主要定位在肺毛细血管内皮细胞。2.高氧暴露时肺毛细血管内皮细胞中SSeCKS蛋白的表达与肺损伤2.1各组各时相点肺组织(W/D)及病理改变:12 h时相点:各组W/D、病理HE染色,均无改变;24 h时相点:各组W/D无差异,II、III、IV组病理HE染色肺泡内出现少量红细胞,I组无改变;48 h时相点:II、III、IV组W/D增加,病理HE染色肺泡内红细胞增多,肺间隔增宽,粒细胞附壁;72 h时相点,II、IV组W/D与I组比较增加,出现明显急性炎症包括炎症细胞浸润、出血、水肿,高氧刺激引起肺组织急性炎症、水肿及肺出血;III组W/D降低,病理改变较II组、IV明显减轻, PKC抑制剂R031-8220可以明显减轻高氧肺损伤病理改变。2.2 72 h时相点各组SSeCKS蛋白的表达及亚细胞位置的变化:I组,SSeCKS蛋白主要分布在细胞膜;II、IV组,SSeCKS蛋白表达与I组比较增加,主要表达在细胞质中,高氧暴露可以引起毛细血管内皮细胞中SSeCKS表达增加及亚细胞位置的改变;III组,SSeCKS蛋白表达与II、IV组比较明显减少,SSeCKS蛋白主要表达在细胞膜,PKC抑制剂R031-8220可以抑制毛细血管内皮细胞中SSeCKS的表达及亚细胞位置的改变。2.3 72时相点各组毛细血管内皮细胞中细胞骨架的的变化:I组:内皮细胞中细胞骨架在细胞质中均匀分布,II、IV组:细胞骨架应力纤维形成,细胞形态改变,细胞间间隙增加;III组中PKC抑制剂可以部分抑制细胞骨架重构。结论:1)新生大鼠持续高氧暴露24 h开始出现急性肺损伤的病理改变,72 h可以引起明显的炎症、水肿及肺出血;2)高氧暴露刺激新生大鼠肺组织中SSeCKS蛋白表达增加,并与高氧肺损伤的程度有关,提示SSeCKS蛋白参与高氧急性肺损伤的病理过程;3)高氧刺激新生大鼠肺毛细血管内皮细胞中SSeCKS的表达增加,引起毛细血管内皮细胞中SSeCKS蛋白亚细胞位置及细胞骨架的重构,提示SSeCKS蛋白通过影响细胞骨架重构,引起毛细血管内皮细胞变形,参与高氧肺损伤的发病机制。4) R031-8220对高氧急性肺损伤有一定的保护作用。